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Título:
Rol del calcio en la liberación de metaloproteinasa-9 en neutrófilos humanos inducido por fMLP
Autor:
Pérez Niesel, Fabián Eduardo
Profesor Patrocinante:
Burgos Aguilera, Rafael Agustín
Grado a Optar:
Químico Farmacéutico - Licenciado en Ciencias Farmacéuticas
Materia:
calcio; neutrófilos humanos; metaloproteinasa; fosforilación
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Química y Farmacia
Año de Aceptación:
2008
Resumen:
El aumento de Caˆ2+ intracelular en neutrófilos está asociado a una serie de respuestas celulares, como liberación de gránulos secretorios, síntesis de mediadores proinflamatorios y producción de radicales libres derivados del oxígeno. Las metaloproteinasas (MMP-9) son endopeptidasas zinc dependientes. Su principal función es degradar matriz extracelular y membrana basal, lo que resulta vital para remodelar tejidos durante embriogénesis y crecimiento. En diversos eventos celulares, se ha descrito que un incremento de Caˆ2+ induciría un aumento en la liberación de MMP-9 vía ERK 1/2 y p38 MAPK en otros tipos celulares. fMLP, genera un ingreso de Caˆ2+ al citoplasma de neutrófilos humanos, lo que regula la activación de la cascada MAPK ERK 1/2 y la consecuente liberación de MMP-9 desde gránulos terciarios. En el siguiente trabajo de tesis se evaluó la participación de las entradas capacitativas de Caˆ2+ en la activación de la vía de las MAPK y en la liberación de MMP-9 desde gránulos terciarios en neutrófilos humanos estimulados por fMLP. Los neutrófilos fueron aislados desde sangre de voluntarios sanos, la movilización de Caˆ2+ fue medida por espectrofluorímetria, la liberación de MMP-9 fue cuantificada por zimografía y la fosforilación de ERK 1/2 y p38 fue determinada por medio de western blot. En todos los casos se utilizó fMLP (0,1μM) como estimulo y diferentes inhibidores de canales de Caˆ2+ e inhibidores de las vías de transducción de señal. Los resultados obtenidos demuestran que la modulación de los canales capacitativos de Caˆ2+ reduce parcialmente la liberación de MMP-9 en neutrófilos humanos. Por otra parte la liberación de MMP-9 estaría mediada por un mecanismo que involucra la vía ERK 1/2, pero independiente de p38 MAPK.
Abstract:
The increase of intracellular Caˆ2+ in neutrophils is associated to a series of cellular responses, such as secretory granules release, synthesis of proinflammatory mediators and production of radicals derived from oxygen species. Metalloproteinases (i.e. MMP-9) are zinc-dependent endopeptidases. Their principal function is to degrade extracellular matrix and basal membrane, being this function necessary to remodel tissues during embryogenesis and growth. In diverse cellular events, it has been described that an increase of calcium would induce an increase in the secretion of MMP-9 via ERK 1/2 and p38 MAPK in other cellular types. FMLP generates an influx of calcium to the cytoplasm of human neutrophils, which regulates the activation of cascade MAPK ERK 1/2 and the consequent MMP-9 release from tertiary granules. In the following thesis work the participation of the capacitative calcium entry on the activation of the MAPK pathway and MMP-9 release in human neutrophils stimulated by fMLP was evaluated. The neutrophils were isolated from peripheral blood of healthy human volunteers, the calcium mobilization was measured by spectrofluorimetry, the MMP-9 liberation was quantified by zymography and the phosphorylation of ERK 1/2 and p38 MAPK was determined through of western blot. In all cases the cells were stimulated with fMLP (0.1μM). In some experiments the neutrophils were pretreated with several MAPK and putative SOCE inhibitors. The obtained results demonstrate that the modulation of the SOCE partially reduces the liberation of MMP-9 in human neutrophils. On the other hand, the MMP-9 liberation is probabily mediated by a mechanism that involves ERK 1/2 pathway, but not of p38 MAPK.
Palabras Clave:
calcio; neutrófilos humanos; metaloproteinasa; fosforilación
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Pérez Niesel, Fabián Eduardo
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2008/fcp438r/doc/fcp438r.pdf