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Título:
Unión del PIP2 al terminal carboxilo de los canales TRPV1 y TRPM8
Autor:
Oyarzún Peña, Ingrid Marisol
Profesor Patrocinante:
Latorre de la Cruz, Ramón; Reyes Pinto, Alejandro Mauricio
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
receptores de potencial transitorio; neurotransmisores; carboxilo
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2007
Resumen:
En mamíferos, las bases moleculares de la percepción de temperatura se encuentran en canales de iones llamados receptores de potencial transitorio (TRP), presentes principalmente en neuronas sensoriales primarias o nociceptores. Estudios previos sugieren que los dominios C-terminal de TRPV1 (receptor vanilloide de calor, con umbral a 43oC) y TRPM8 (receptor de mentol y frío con umbral a 15oC), son estructuras críticas para la función del canal, la cual estaría determinada por componentes intracelulares. Particularmente, el fosfatidilinositol bifosfato (PIP2) es un importante modulador de los canales termo-TRP, activa a TRPM8 e inhibe a TRPV1. En el dominio C-terminal de ambos canales existe un sitio conservado que supuestamente intervendría en la activación del canal mediada por PIP2. Sin embargo, aún queda por demostrar la unión directa de PIP2 a los C-terminales de ambos canales. En nuestro laboratorio, generamos proteínas de fusión entre los C-terminales y MBP (Maltose Binding Protein), las purificamos por cromatografía de afinidad y finalmente, realizamos ensayos de unión a PIP2 de acuerdo al protocolo de Simon Dowler. Demostramos analíticamente que TRPM8 como TRPV1 unen a PIP2 en su extremo carboxilo terminal.
Abstract:
In mammals, the molecular bases of temperature perception reside in Transient Receptors Potential (TRP) ion channels, which are located mainly on primary sensory neurons called nociceptors. Previous studies suggest that C-terminals of TRPV1 (vanilloid heat receptor with a threshold around 43oC) and TRPM8 (menthol and cold receptor with a threshold around 15oC) are critical structures for channel function. In particular, phosphatidylinositol bisphosphate (PIP2) is an important modulator of thermo-TRPs, it activates TRPM8 and inhibits TRPV1. At the C-terminal domain of both channels there is a conserved motif involved in PIP2 channel activation. However, the direct PIP2 binding to the C-terminals of both channels have not been demonstrated yet. In our laboratory, we cloned and purified fusion proteins consisting of the TRPM8 and TRPV1 C-terminals in tandem with a Maltose Binding Protein (MBP). The proteins were purified using affinity chromatography. PIP2 binding assays were performed using the Simon Dowler’s protocol. This methodology allowed us to asses analytically the PIP2 binding to carboxy-terminals of both TRPM8 and TRPV1.
Palabras Clave:
receptores de potencial transitorio; neurotransmisores; carboxilo
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Oyarzún Peña, Ingrid Marisol
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2007/fco.98u/doc/fco.98u.pdf