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Título:
Caracterización de sitios de unión para factores de transcripción en las regiones regulatorias de los genes duplicados de PIT-1 de Cyprinus carpio
Autor:
Castro Avendaño, Leonardo Antonio
Profesor Patrocinante:
Kausel, Gudrun
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
carpa - peces; expresión del gen; glándula pituitaria; aclimatación
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2007
Resumen:
En el teleósteo Cyprinus carpio el eje hipotálamo-hipofisiario juega un rol importante en la organización de la respuesta compensatoria para permitir la adaptación reversible a cambios de su medio ambiente. El factor de transcripción Pit1, específico de pituitaria, regula la expresión de los genes de hormona de crecimiento (GH), prolactina (PRL), subunidad β de la hormona estimulante de la tiroides (β-TSH), somatolactina (SL) y su propio gen. Los cambios modulares de elementos cis-regulatorios en los genes duplicados de Pit-1 reflejan la dinámica de secuencias regulatorias en este teleósteo, cuyo genoma se duplicó unos 15 millones de años atrás. Análisis in vitro revelaron la interacción específica de factores nucleares a secuencias de consenso conservadas en los genes I y II y sitios exclusivos en el gen-I, que podrían estar implicados en la regulación de la expresión diferencial en carpas aclimatizadas a invierno, las que muestran un mayor nivel de transcritos del gen-I. Así, el sitio ccP3 de unión al factor Pit1 y el sitio ccC1 de unión al factor CREB, mostraron interacción específica con factores nucleares en ambos genes Pit1, mientras que los sitios ccP5 y ccP6 de unión al factor Pit1 mostraron unión sólo en el gen-I. Por otra parte, los sitios ccM1 y ccM2, correspondientes a elementos de respuesta a metales (MRE), también mostraron unión a factores nucleares. El sitio ccM2 interaccionó específicamente con un factor nuclear en ambos genes, mientras que el sitio ccM1 mostró unión exclusivamente en el gen-I de Pit1. Este elemento MRE no había sido descrito antes en peces. Otro acercamiento se obtuvo con un anticuerpo policlonal anti-cPit1 que inmunorreaccionó en núcleos de cortes sagitales de pituitaria de carpa. Futuros estudios in vivo deberían considerar este anticuerpo para comprender la dinámica de nuevos módulos regulatorios en los genes duplicados de Pit1 de carpa.
Abstract:
In the teleost Cyprinus carpio the hypothalamus-hypophysis axis plays an important role in organizing the compensatory response to allow the reversible adaptation to changes in the environment. The pituitary specific transcription factor Pit1, regulates the expression of growth hormone, prolactin, β-thyroid stimulating hormone, somatolactin genes and Pit1 itself. Modular changes of cis-regulatory elements in the Pit1 duplicated genes reflect the dynamics of regulatory sequences in this teleost which duplicated its genome about 15 MYA. In vitro analyses revealed the specific interaction of nuclear factors to conserved consensus sequences in the gene-I and gene-II, and exclusive sites in gene-I, that might be involved in the regulation of differential expression in winter acclimatized carp, which showed a higher level of transcripts from gene-I. Thus, the Pit1 binding site ccP3 and the CREB binding site ccC1, showed specific interaction with nuclear factors in both Pit1 genes, while the Pit1 binding sites ccP5 and ccP6 showed binding only in gene-I. On the other hand, the ccM1 and ccM2 sites, corresponding to metal responsive elements (MRE), showed binding to nuclear factors as well. The ccM2 site interacted specifically with a nuclear factor in both genes, while the ccM1 site showed binding exclusively in Pit1 gene-I. This MRE had not been described before in fishes. Another approach was persued with a polyclonal antibody, anti-cPit1, which immunoreacted in nuclei of sagital slides of carp pituitary. For future in vivo studies this antibody might be useful to reveal the dynamic of new regulatory modules in the carp Pit1 duplicated genes.
Palabras Clave:
carpa - peces; expresión del gen; glándula pituitaria; aclimatación
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Castro Avendaño, Leonardo Antonio
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2007/fcc355c/doc/fcc355c.pdf