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Título:
Evaluación del efecto de andrografolido en la agregación y desagregación de las fibras amiloides
Autor:
Barrientos Accardi, Claudia Genoveva
Profesor Patrocinante:
Hancke Orozco, Juan Luis
Grado a Optar:
Químico Farmacéutico - Licenciado en Ciencias Farmacéuticas
Materia:
enfermedad de Alzheimer; enfermedades neurodegenerativas
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Química y Farmacia
Año de Aceptación:
2007
Resumen:
En esta investigación se evaluó el efecto de andrografolido sobre la agregación y desagregación del péptido β-amiloide. Una de las lesiones observadas en un paciente con enfermedad de Alzheimer son las placas seniles, las cuales están formadas por la deposición extracelular de estos agregados amiloideos. Estos agregados corresponden a un autoensamblaje del péptido Aβ ˇ1-40 de forma monomérica, (que es un producto normal del metabolismo y no es tóxico para las células neuronales), a formas multiméricas y poliméricas con una potente toxicidad. El seguimiento del proceso de agregación del péptido in vitro se realizó por turbidimetría a 405 nm y se midió la absorbancia de la reacción que contiene el péptido Aβ ˇ1-40, en ausencia y presencia de andrografolido. La desagregación del péptido in vitro fue seguida por fluorimetría con tioflavina (ThT) que se une específicamente al amiloide, siendo monitoreada por excitación a 437 nm y emisión a 485 nm. Por otro lado, es importante resaltar que el péptido Aβ ˇ1-40 agregado, tiene un claro efecto neurotóxico y neurodegenerativo. En este trabajo se estudio el efecto de andrografolido en cultivo primario de neuronas corticales en presencia de Aβ ˇ1-40 agregado, para lo cual se utilizaron anticuerpos anti-tubulina tirosinada y anti-MAP-2, lo que fue observado bajo el microscopio de fluorescencia. Se concluyó que andrografolido es un compuesto que inhibe la agregación del péptido Aβ ˇ1-40 en fibras amiloide, además también es capaz de inducir la desagregación de las fibras amiloides formadas, siendo este proceso tiempo y concentración dependiente. Por otra parte, presenta un efecto neuroprotector, pues mantiene la morfología de las neuronas en presencia de agregados amiloidogénicos.
Abstract:
The present investigation evaluated the effect of andrographolide on the aggregation and disaggregation of ß-amyloid peptide. One of the lesions observed in Alzheimer’s patients are the senile plaques, formed by the extracellular deposition of amyloid aggregates. These aggregates are the result of the self-assembly of monomeric Aß ˇ1-40 peptides, (which are normal products of metabolism and non-toxic for neuronal cells), into multimeric and polymeric forms of high neurotoxicity. The in-vitro peptide aggregation process was performed by turbidimetry at 405 nm and the absorbance of the reaction of Aß ˇ1-40-containg peptides was determined in presence and absence of andrographolide. The in-vitro peptide disaggregation was evaluated by Thioflavin T (ThT) fluorimetry that binds specifically to the amyloid and monitored by excitation at 437 nm and emission at 485 nm. On the other hand, it is important to mention that the Aβ ˇ1-40 peptide aggregates has a significant neurotoxic and neurodegenerative effect. Therefore, in this work we also studied the effect of andrographolide on a primary culture of cortical neurons in the presence of Aß ˇ1-40 aggregates, by means of tyrosinated antitubuline and anti-Map-2 antibodies, and evaluated by fluorescence microscopy. Finally, it can be concluded that andrographolide is a compound that inhibits the fibrillar aggregation of Aß ˇ1-40. Moreover, it also induces disaggregation of formed amyloid fibers, a process time and concentration dependent. On the other hand, it posseses a neuroprotective effect, since it maintains the morphology of neurons in the presence of amyloidogenic aggregates.
Palabras Clave:
enfermedad de Alzheimer; enfermedades neurodegenerativas
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Barrientos Accardi, Claudia Genoveva
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2007/fcb275e/doc/fcb275e.pdf