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Título:
Evaluación del desarrollo de embriones de conejo en cultivo en estufa y baño María
Autor:
Hidalgo Campos, Rossana Isabel
Profesor Patrocinante:
Gatica García, Renato
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
conejos; cultivo in vitro; desarrollo de embriones
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
2006
Resumen:
El objetivo de este estudio fue comparar dos métodos de cultivo in vitro (baño María y estufa), para embriones de conejo en estado de mórula, obtenidos de hembras superovuladas con Extracto Hipofisiario Equino (EHE) y de hembras no superovuladas. Ocho conejas mestizas adultas fueron distribuidas en dos grupos de 4 conejas cada uno. Las conejas del primer grupo fueron superovuladas con (EHE), con una dosis de 2,5 mg/kg, vía subcutánea, cada 12 horas y durante dos días. A las 24 horas de terminado el tratamiento, se realizó detección de celo. Las conejas del segundo grupo (o grupo control) fueron cubiertas sin tratamiento. Para ambos grupos se aceptó como signo positivo de celo, la presentación de turgencia y coloración rojo-púrpura de la vulva, junto con la aceptación del macho. Cuarenta y ocho horas posterior a la última cópula, se procedió al sacrificio de las hembras y a la extracción del tracto reproductivo. Se efectuó lavado de cada oviducto con 20 ml de solución PBS con 5 % de suero bovino. Del grupo de conejas superovuladas se obtuvo un promedio de 29,5 ova fecundadas (mórula), más 1,25 ova no fecundadas. En el grupo control sólo se obtuvo ova fecundada, con un promedio de 8,5 por hembra. Los embriones obtenidos en estado de mórula fueron separados en dos grupos similares, para ser llevados a cultivos in vitro, en forma paralela, tanto en estufa al 5% de CO2, utilizado placas Petri como a baño María con uso de tubos de vidrio. En ambos cultivos se utilizó medio TCM 199, y fueron mantenidos a una temperatura de 38,5ºC por 72 horas. El análisis de los resultados consideró sólo los embriones que se desarrollaron hasta el estado de blastocisto. En el grupo control, para el cultivo en baño María se obtuvo un 29,4% de desarrollo y un 88,2% de desarrollo para los de estufa, presentando diferencias estadísticamente significativas (p<0,05). En el grupo de las hembras superovuladas se obtuvo un 0% de desarrollo para el cultivo en baño María y un 80% de desarrollo en cultivo en estufa. Por lo tanto, el desarrollo en cultivo in vitro para los embriones del grupo control fue mayor en ambos métodos con respecto al grupo de hembras superovuladas, con una diferencia estadísticamente significativa (p<0,05). Se puede concluir que el EHE logra superovulación en conejas de forma satisfactoria, pero sus embriones presentan un menor porcentaje de desarrollo en cultivos in vitro, con respecto a los embriones obtenidos de hembras no tratadas. En el cultivo a baño María, la ausencia de aire y la densidad de embriones en el tubo fue un factor crítico para el desarrollo de los embriones, por lo tanto, este método, si bien es más fácil y económico de realizar, no demostró ser efectivo para el desarrollo embrionario.
Abstract:
EVALUATION OF RABBIT EMBRYOS DEVELOPMENT IN WATER BATH AND INCUBATOR CULTURE. The aim of this work was compare to methods of culture in vitro (water bath and incubator) of rabbit embryos in a morulae stage, obtained of female supervulated with horse anterior pituitary (hap) and female non superovulated. eight females half-bred rabbits, adult, was ditributed into two group of 4 rabbit. The female rabbits of the first group were supervulated with EHE, applying a dose of 2.5 mg/bw. in a subcutaneous way every 12 hours for two days. After 24 hours when the treatment was finished the heat detection was done in these female. The rabbit female of second group (control group) were mating whithout treatment. To both groups of rabbit it was accepted as a positive heat sing when they showed a vulve in a turgency state a purple-red color with the acceptance of male. After 48 hours they were sloughed and the extraction of the reproductive tract took place. Made washing the oviducts with 20 ml. of PBS (Plus 5% of bovine serum) each of them. Of the groups the rabbit superovulate were get 29.5 fecunded ova as mean (morulae) more 1.25 non fecunded ova as mean. In the control group only 8.5 fecunded ova as mean was obtained. The embryos get in morulae stage was separated in two culture groups, the culture was carried out in parallel way; in Petri dish in incubator with 5% CO2 and water bath with glass tubes. Inboth cultures it was use TCM 199 and were maintained at 38,5ºC during 72 hours. In the analysis of the results analysis were considered only embryos developmented to blastocyst stage. The control group cultured in incubator obtain 29% of development and the control group cultured in incubator obtain 88.2% of development; this difference is statistically significative (p<0.05). In the superovulate females group it was obtain 0% of development to water bath culture embryos and 80% of development to incubator culture embryos. Therefore the development of in vitro cultured embryos of control group was greater in both methods in relation to the superovulated females groups, this difference is statistically significative (p<0.05). We can concluded that HAP achieves superovulation in rabbits females in a satisfactory way, but their embryos show a lesser percentage of development in in vitro culture, in relation to embryos obtain of control group females. In the bath water culture the absence of oxygen and the embryos density in glassy tube was a critical factor to the embryo development, therefore although this method is easier and more economical to do; it did not prove to be effective for the development of embryos.
Palabras Clave:
extracto hipofisiario equino (EHE); cultivo de embriones; conejo
Palabras Clave:
horse anterior pituitary; cultivation of embryos; rabbit
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Hidalgo Campos, Rossana Isabel
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2006/fvh632e/doc/fvh632e.pdf