Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
El Na+ activa a la glicolisis en células HeLa-Luc+
Autor:
Schmied Vásquez, Astrid María
Profesor Patrocinante:
Barros O., Felipe
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biológicas
Materia:
citología; metabolismo energético; células - metabolismo
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2006
Resumen:
El modelo de activación del metabolismo energético celular por parte del Na+ propone como mediador a la Na+/K+ ATPasa, sugiriendo que influjos del catión aumentan la producción de ATP para suplir la demanda de la proteína, que alcanza hasta un 80% del ATP celular. De esta manera, la Naˆ+/Kˆ+ ATPasa articula la activación del metabolismo provocado por el Naˆ+ según el modelo aceptado. Utilizando una línea celular epitelial que expresa constitutivamente el gen reportero de la luciferasa (HeLa-Lucˆ+) para medir la concentración de ATP citosólico en tiempo real, observamos que la gramicidina, un ionóforo de Naˆ+, indujo un alza inmediata de la luminiscencia, con una tasa de 2,8 ± 0,5%/min. El efecto del ionóforo, sin embargo, no fue anulado por la ouabaína, un inhibidor específico de la bomba de Na+, arrojando valores cercanos a la tasa control (3,4 ± 1,0%/min). Para confirmar la participación del Naˆ+, se efectuaron experimentos en donde éste se reemplazó equimolarmente por el NMDGˆ+, un catión no permeable, advirtiéndose una disminución en la luminiscencia a razón de –2,1 ± 0,3%/min en respuesta a la gramicidina. Con el objetivo de discriminar la vía metabólica sensible al Naˆ+, se realizaron experimentos utilizando la oligomicina-rotenona como inhibidores mitocondriales y el ácido iodoacético (IAA) para detener a la glicólisis. La supresión mitocondrial no abolió la respuesta generada por la gramicidina, aumentando la luminiscencia a razón de 3,5 ± 0,6%/min; mientras que la respuesta a la inhibición glicolítica fue variable. Estos resultados son inconsistentes con el modelo aceptado, y en cambio sugieren, que el Na+ es capaz de activar la producción glicolítica de ATP por un mecanismo independiente a la actividad de la Naˆ+/Kˆ+ ATPasa.
Abstract:
The model of activation of energetic cellular metabolism by Na+ proposes to Naˆ+/Kˆ+ ATPase as mediator, suggesting that influxes of the cation increases the ATP production to supply the demand of the protein, that reach until an 80% of the cellular ATP. In this way, the Naˆ+/Kˆ+ ATPase articulates the activation of metabolism evoked by Naˆ+ according to the accepted model. Using an epitelial cellular line that constituently expresses the luciferase reporter gen (HeLa-Lucˆ+) to measure cytosolic ATP concentration in real time, we observed that gramicidin, a Naˆ+ ionophore, induces an immediately raise of luminescence, with a rate of 2.8 ± 0.5%/min. The effect of the ionophore, nevertheless, was not abolished by ouabain, a specific inhibitor of the sodium pump, throwing near values to the control rate (3.4 ± 1.0%/min). In order to confirm the participation of Naˆ+, there were done experiments where the cation was replaced by NMDGˆ+, a no permeable cation, warning a diminution in the luminescence to rate of –2.1 ± 0.3%/min in response to gramicidin. With the objective to discriminate the metabolic path sensitive to Naˆ+, there were made experiments using oligomycin-rotenone as mithocondrial inhibitors and iodoacetic acid to stop glycolisis. The mithocondrial suppression did not annul the response generated by gramicidin, increasing the luminescence to rate of 3.5 ± 0.6%/min; while the answer to glycolitic inhibition was variable. These results are inconsistent with the accepted model, and on the contrary suggest, that Naˆ+ is able to activate the glycolitic ATP production by an independent mecanism of the Naˆ+/Kˆ+ ATPase activity.
Palabras Clave:
citología; metabolismo energético; células - metabolismo
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Schmied Vásquez, Astrid María
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2006/fcs354n/doc/fcs354n.pdf