Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Participación de los extremos carboxilo terminales del receptor GABAb en su desensibilización, estabilidad y movimientos laterales en membrana celular
Autor:
Sandoval Galarce, Lisette Pamela
Profesor Patrocinante:
Couve, Andrés
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
neurotransmisores; sistema nervioso central; receptores GABAb
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2006
Resumen:
GABA es el principal neurotransmisor inhibitorio del sistema nervioso en mamíferos. La acción lenta de GABA es mediada por el receptor GABAB. El receptor GABAB pertenece a la superfamilia de receptores acoplados a proteína G trimérica, e interactúa específicamente con proteínas GBαB del tipo GBαiB. El receptor presenta características inusuales de funcionamiento como la heterodimerización obligatoria entre GABABR1 y GABABR2, las únicas dos subunidades conocidas, el aumento de la actividad en respuesta a la fosforilación por PKA y la ausencia de internalización desde la superficie celular. En la presente tesis se investigó la participación de las secuencias carboxilo terminal del receptor GABAB en la permanencia de éste en la membrana celular de células COS-7 mediante biotinilización de proteínas de superficie y en los movimientos laterales realizando ensayos de Recuperación de la Fluorescencia luego del Fotoblanqueamiento (FRAP) en células HEK293. Adicionalmente se estudió el efecto de la proteína Mupp-1 en la movilidad de GABABR2 por FRAP y la desensibilización del receptor en respuesta a agonista evaluando el incremento de la fosforilación de las proteínas ERK1/2 como efecto de la activación del receptor GABAB. Los resultados obtenidos nos indican que la región carboxilo terminal del receptor GABAB no afecta la permanencia de un pool de receptores estable en membrana celular luego de tratamiento crónico con agonista. Sin embargo, este dominio si participaría en la movilidad de GABABR2 en la superficie celular de células HEK293 disminuyéndola. Además, nosotros podemos concluir que la población de receptores GABAB de membrana se desensibiliza parcialmente luego de tratamiento con agonista en células HEK293.
Abstract:
GABA is the main inhibitory neurotransmitter in the mammalian central nervous system. The slow action of GABA is mediated by the GABABBB receptor. It belong to the superfamily of G protein coupled receptors, and interact specificaly with GBαiB. The receptor presents unusual functional characteristics like the obligatory heterodimerisation between GABABR1 and GABABR2, the only two known subunits, the increase of activity due to PKA phosphorylation and the absence of internalization from the cellular surface. In the present thesis we investigated the role of the carboxyl terminal domains of GABAB receptors in their permanence in the cellular membrane and their lateral mobility. In order to achieve this, we have used biotinylation of surface proteins and Fluorescence Recover after Photobleaching assays (FRAP) in COS-7 and HEK293 cells. In addition, we have studied the effect of the protein Mupp-1 in the mobility of GABABR2 and the desensitization of receptor due to agonist binding. The results obtained indicate that the C-tail of GABAB receptor did not affect the permanence of the pool of receptors at the plasma membrane. However, this domain participated in the lateral mobility of GABABR2 subunit at the cell surface of HEK293 cells as demonstrated by FRAP experiments. Moreover, we can conclude that the membrane population of GABAB receptors is partially desensitized after agonist treatment in HEK293 cells.
Palabras Clave:
neurotransmisores; sistema nervioso central; receptores GABAb
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Sandoval Galarce, Lisette Pamela
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2006/fcs218p/doc/fcs218p.pdf