Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Estudio comparativo de apolipoproteína A-I de carpa y humana a nivel estructural y funcional
Autor:
López Leal, Rodrigo Alejandro
Profesor Patrocinante:
Amthauer Matthei, Rodolfo J.
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biológicas
Materia:
apolipoproteínas; inmunohistoquímica; carpa - peces
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2006
Resumen:
La lipoproteína de alta densidad (HDL) y su principal constituyente proteico, apolipoproteína A-I (apoA-I), juegan un rol central en el transporte reverso de colesterol. Estudios previos han demostrado que el extremo carboxilo terminal de apoA-I es crucial en la asociación a lípidos de membrana, evento clave en la movilización del colesterol. Las apoA-I de distintas especies presentan baja similitud en su estructura primaria, particularmente en su dominio carboxilo terminal. En el presente trabajo se obtuvo la secuencia completa del cDNA para apoA-I de carpa y con ella, se realizó un estudio comparativo de la estructura y función de apoA-I, entre 2 especies que presentan alta divergencia en su estructura primaria, como lo son apoA-I de humano y carpa. Se estableció que a pesar de ello, ambas presentan las características regiones de α- hélices anfipáticas flanqueadas por residuos de prolinas. Estudios de predicción de estructura secundaria indican que apoA-I de carpa tendría un contenido significativamente mayor de estructura α-helicoidal que su ortólogo en humano. La interacción de apoA-I con lípidos se evaluó mediante un método turbidimétrico que utiliza vesículas multilaminares de dimiristoilfosfatidil colina (DMPC). La apoA-I de carpa resultó ser un 50 % más eficiente en su interacción con las vesículas que la proteína humana. Sin embargo, esta interacción disminuyó drásticamente cuando se utilizó apoA-I truncada en el extremo carboxilo terminal. Estos resultados sugieren que el extremo C-terminal de apoA-I de carpa sería más eficiente en la interacción con membranas que el dominio correspondiente de apoA-I humana. Además nuestros estudios demuestran que tanto apoA-I libre de lípidos como asociada a HDL, es capaz de unirse a membranas eucarióticas heterólogas.
Abstract:
High density lipoprotein (HDL) and its main protein, apolipoprotein A-I (apoA-I), plays a central rol in the reverse transport of cholesterol. Previous studies have demonstrated that the carboxy termini domain of apoA-I is crucial for its association to membrane lipids, a key event in the mobilization of cholesterol. ApoA-I of different species displays low similarity in its primary structure, particularly in their C-termini. The aim of the present work was to obtain the complete cDNA sequence for carp apoA-I and to compare the structure and function of apoA-I, between two species that show a high divergence in their primary structure, namely human and carp apoA-I. We established that in spite of their difference, both present the characteristic amphipatics helices flanked by residues of prolines. Secondary structure prediction studies indicate that carp apoA-I would have a significantly greater content of α-helix structure than its human ortolog. The interaction of apoA-I with lipids was evaluated by means of a turbidimetric assay that uses multilamellar vesicles of dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC). Carp apoA-I resulted to be a 50 % more efficient in its interaction with the vesicles than the human protein. Nevertheless, this interaction diminished drastically when apoA-I truncated in the C-termini was used. These results suggest that the C-terminal end of carp apoA-I would be more efficient in the interaction with membranes than the corresponding domain of human apoA-I. In addition our studies demonstrate that both, lipids free apoA-I and HDL, are able to associate to heterologous eukaryotic membranes.
Palabras Clave:
apolipoproteínas; inmunohistoquímica; carpa - peces
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
López Leal, Rodrigo Alejandro
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2006/fcl864e/doc/fcl864e.pdf