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Título:
Clonamiento del precursor de isotocina de Salmo salar y evaluación de su expresión en peces sanos y enfrentados a patógenos bacterianos
Autor:
Fuentes Alburquenque, Sebastián Alejandro
Profesor Patrocinante:
Figueroa Valverde, Jaime Eugenio
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biológicas
Materia:
salmón del atlántico; inmunohistoquímica; clonación
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2006
Resumen:
Prolactina (PRL) es considerada la hormona más versátil de los vertebrados; entre los más de 300 efectos atribuibles a este péptido de origen hipofisiario se encuentra la modulación del sistema inmune, tanto en mamíferos como en peces. Respecto a la liberación de esta hormona desde las células lactotropas, se ha postulado que el motivo copeptín (Cp), presente en los precursores de isotocina/vasotocina y vasopresina, posee una actividad liberadora de PRL. En el presente trabajo fue clonado el precursor de isotocina del Salmón del Atlántico, Salmo salar, a partir de RNA total de hipotálamo. La búsqueda in silico de secuencias permitió diseñar partidores específicos, con los que se logró clonar y secuenciar un fragmento de 510 pb, cuya secuencia aminoacídica deducida contiene la típica estructura de un precursor de esta clase: Péptido señal - Isotocina - Neurofisina - Copeptín. El análisis de homologías mostró una alta identidad con precursores de especies salmonídeas cercanas. Por otra parte, se evaluaron posibles diferencias en la expresión de este péptido en peces en diferente estado patológico. Fueron usados para este objetivo alevines controles y desafiados con los patógenos Vibrio ordalii, Piscirickettsia salmonis y Renibacteruim salmoninarum; en ellos se evaluó el nivel del copeptín a dos niveles: (1) transcripción, mediante RT-PCR competitivo y (2) expresión, por inmunohistoquímica. En ambos casos no se observaron diferencias significativas. Finalmente, por medio de inmunohistoquímica se observó el patrón de distribución de Cp y su relación morfológica con las células lactotropas de la pituitaria en cortes sagitales de la región hipotalámica de salmones adultos. Por tratarse de una especie de gran valor comercial en nuestro país, resulta de interés conocer a fondo los mecanismos que regulan la inmunidad innata del Salmón del Atlántico.
Abstract:
Prolactin (PRL) is thought to be the most versatile hormone in the vertebrates, this hypophysial peptide has more than 300 effects including the modulation of the immune system in mammals and fish. Concerning the release of this hormone from the lactotroph cells, the copeptin moiety (Cp) of the isotocin/vasotocin and vasopressin precursors has been proposed as a putative PRL releasing factor. In the present work, the isotocin precursor of the Atlantic Salmon (Salmo salar) was cloned from hypothalamus total RNA. Specific primers were designed by in silico sequence search, with which was possible to clone and sequence a 510 bp fragment. The deduced aminoacid sequence has the typical structure observed in these precursors: Signal peptide - Isotocin - Neurophysin - Copeptin. The homology analysis showed high identity with precursors from other salmonid species. Control and Vibrio ordalii, Piscirickettsia salmonis and Renibacteruim salmoninarum-challenged fries were used to evaluate potential differences in the expression of this peptide. Copeptin levels were assessed by: (1) transcription by competitive RT-PCR and (2) expression by immunohistochemistry. No significant differences were observed in both cases. Moreover, immunohistochemical assays in sagittal sections of hypothalamus from adult salmons showed the pattern of Cp and its morphologic relationship with the lactotroph cells of the pituitary. This work contributes to the knowledge on the mechanisms that regulate the innate immunity of the Atlantic Salmon, of high commercial value in our country.
Palabras Clave:
salmón del atlántico; inmunohistoquímica; clonación
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Fuentes Alburquenque, Sebastián Alejandro
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2006/fcf9541c/doc/fcf9541c.pdf