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Título:
Aplicación y evaluación de metodologías para el cultivo primario de celulas y explantes de organos de abalón rojo (Haliotis rufescens)
Autor:
Pinto Ríos, Paula Andrea
Profesor Patrocinante:
Henríquez S., Ricardo
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
abalón; moluscos - cultivo; moluscos - técnicas de cultivo
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
APLICACION Y EVALUACION DE METODOLOGIAS PARA EL CULTIVO PRIMARIO DE CELULAS Y EXPLANTES DE ORGANOS DE ABALON ROJO (Haliotis rufescens).* Los objetivos de esta investigación fueron aplicar y evaluar metodologías para el cultivo primario de células obtenidas desde la hemolinfa (hemocitos) de abalones rojos (H. rufescens) adultos y cultivos primarios por degradación enzimática y por explantes de órganos de abalones rojos (H. rufescens) juveniles y adultos. Para los cultivos primarios de hemocitos se extrajo la hemolinfa desde el seno cefálico, resuspendiéndola inmediatamente en una solución 1:5 con L-15 modificado I (Anexo 2). Al desarrollar los cultivos primarios por degradación enzimática se utilizaron abalones juveniles y adultos, procesados con tripsina al 0,25%, mantenidos alternadamente con tres medios de cultivo, L-15 modificado I, II y III (Anexo 2). Para los cultivos primarios de explantes de órganos de abalón, se desinfectaron con formalina 10 ppm por un minuto, luego se enjuagados con agua de mar estéril, para luego ser picados en trozos de 1 mmˆ3 e incubados con L-15 modificado II y III alternadamente. Todas las placas fueron incubadas a 15 ºC y 20 ºC, en forma paralela. De los resultados obtenidos, los hemocitos no lograron sobrevivir más de 24 h de incubación, por lo tanto no se logro desarrollar el cultivo primario, a diferencia de lo realizado por otros autores que obtuvieron resultados exitosos. En cuanto a lo obtenido en los cultivos primarios por degradación enzimática, las células no lograron adherirse al fondo del frasco de cultivo, sin embargo en otros estudios realizados en moluscos y crustáceos, las células lograron adherirse y desarrollar una monocapa de células. El cultivo primario de explantes de órganos, se logro desarrollar parcialmente, ya que el crecimiento celular se detuvo después de 15 días de cultivo. Respecto a los diferentes medios de cultivo y temperaturas no se observaron diferencias en el comportamiento celular. Los resultados obtenidos podrían deberse a la falta de algunos nutrientes requeridos por la célula para su sobrevivencia.
Abstract:
APLICATION AND EVALUATION OF METHODOLOGIES FOR THE PRIMARY CULTURE OF CELLS AND EXPLANTS FROM ORGANS OF RED ABALONE (Haliotis rufescens).* The objectives of this research was aplication and evaluation methodologies for the primary culture of cells obtained from the hemolymph (hemocytes) of adult red abalones (H. rufescens), primary cultures by enzymatic degradation and from explants of organs of red abalone of both, juveniles and adults. For the development of primary cultures of hemocytes adult abalones were used, extracting the hemolymph from the cephalic cavity, resuspending it immediately in a solution 1:5 of L-15 modified I (Annex 2). To develop primary cultures by enzymatic degradation juvenile and adult abalones were used, processed with 0.25% trypsin, kept alternatively with three culture mediums, L-15 Modified I, II and III (Annex 2). For primary cultures of explants from organs of abalones, they were disinfected with 10 ppm Formalin for one minute and soaked in sterile sea water after which they were cut in 1 mm³ pieces and incubated with L-15 modified II and III, alternatively. All the plates of cell culture were incubated at 15 °C and 20 °C, together. From the results obtained, the hemocytes didn’t survive more than 24 hours therefore it was not possible to develop the primary culture. Regarding the primary cultures by enzymatic degradation, the cells were not able to fix to the bottom of the culture glass after 120 days of incubation at 15 °C and 20 °C. The primary culture of explants from organs, was partially developed since the cell growth stopped after 15 days of incubation, nevertheless the cells stayed fixed to the bottom of the culture plate. Regarding the different culture mediums and temperatures no differences in cell behavior was noted. The results obtained may be due to the lack of certain nutrients required by the cell for its survival.
Palabras Clave:
abalón; haliotis rufescens; cultivos primarios
Palabras Clave:
abalone; haliotis rufescens; primary cultures
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Pinto Ríos, Paula Andrea
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fvp659a/doc/fvp659a.pdf