Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Cultivo de esferoides de células endoteliales EA.hy926 en matrices de colágeno: evidencias del efecto angiogénico de cininas
Autor:
Silva Vera, Paula Daniela
Profesor Patrocinante:
Concha Murray, Miguel Luis
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
cultivo celular; endotelio vascular; cininas
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
Las células endoteliales (CE) son un elemento celular central en la respuesta angiogénica. Recientes experimentos, realizados principalmente en animales, han sugerido que las cininas además de su función proinflamatoria poseerían actividad angiogénica. Para demostrar específicamente el efecto angiogénico de las cininas, en esta Tesis de Grado empleamos el cultivo de CE EA.hy926 humanas en matrices de colágeno. Con este propósito las CE fueron precultivadas como esferoides multicelulares en medio de cultivo DMEM-HAT-metilcelulosa. A continuación se cultivaron por 3 días en matrices de colágeno tipo I en presencia de bradicinina (BK), lisina-BK (LBK) y Lis-des-[Arg9]-BK (LDBK). Como controles se emplearon cultivos no estimulados o tratados con el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF). En algunos casos los esferoides fueron co-estimulados con interleuquina (IL)-1β. Los esferoides fueron estudiados con microscopía de contraste de fase, fotografiados y la formación de yemas de CE cuantificada mediante el programa Image-Pro Plus 3.0. La proliferación celular se evaluó mediante incorporación de BrdU y el fenotipo endotelial fue controlado mediante revelado inmunohistoquímico del factor de von Willebrand. Adicionalmente, la apariencia tridimensional de las yemas y tubos endotelizados generados fue analizada en cortes histológicos seriados. Los resultados obtenidos demuestran que BK, LBK y LDBK inducen la respuesta angiogénica de las CE EA.hy926. Con el empleo de los antagonistas específicos HOE140 y ATB1 y de co-estimulación con IL-1β, resultó evidente que el efecto de las cininas era mediado por receptores B2 y de manera inducible, por receptores B1. Nuestros resultados también subrayan que la producción de esferoides de CE y su cultivo en matrices de colágeno es un método altamente reproducible y angiogénicamente eficiente.
Abstract:
The endothelial cell (EC) is a central factor in angiogenesis. Recent experiments, mainly in experimental animals, have suggested that kinins in addition to their pro-inflammatory function would have an angiogenic effect. In order to demonstrate this effect, in this Thesis we culture EA.hy926-human EC in collagen gels. With this purpose the EC were pre-cultured as multicellular spheroids in DMEM-HAT-methylcellulose culture medium. Then, spheroids were grown in type I collagen gels and stimulated with bradykinin (BK), lysil-BK (LBK) or Lys-des-[Arg9]-BK (LDBK) for a period of 3 days. Non stimulated cultures or cultures treated with the basic fibroblasts growth factor (bFGF) were used as control. In some cases the spheroids were also co-stimulated with interleukin (IL)-1β. Then, the spheroids were in situ studied with phase constrast microscopy photographed and EC sprouting quantified by Image-Pro Plus 3.0 program. BrdU incorporation and von Willebrand factor both assayed by inmunohistochemistry, let us evaluate cellular proliferation and monitored the endothelial phenotype, respectively. In addition, the three-dimensional appearance of the sprouting and endothelized tubes generated was analyzed in seriated histological sections. The results obtained in the present work demonstrate that the agonists BK, LBK and LDBK induce the angiogenic response of EC EA.hy926. The use of the specific antagonists HOE140 and ATB1 confirmed that the angiogenic effect is mediated by B2 kinin receptors and by IL-1β−inducible B1 receptors. Our results also highlight that the production of EC spheroids and its culture in collagen gels is an angiogenic efficient, highly reproducible and low-cost method.
Palabras Clave:
cultivo celular; endotelio vascular; cininas
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Silva Vera, Paula Daniela
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcs586c/doc/fcs586c.pdf