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Título:
Rol de calcio sobre los cambios de pH intracelular y su relación con la producción de superóxido en neutrófilos de bovino
Autor:
Sanhueza Silva, Alejandra Maribel
Profesor Patrocinante:
Burgos Aguilera, Rafael Agustín
Grado a Optar:
Químico Farmacéutico - Licenciado en Ciencias Farmacéuticas
Materia:
bovinos; neutrófilos; factor agregante plaquetario
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Química y Farmacia
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
En el presente trabajo de tesis, se evaluó la participación de Ca2+ intracelular sobre los cambios de pH y la producción de superóxido en neutrófilos de bovino, utilizando ionomicina como ionóforo de Ca2+. El aumento de Ca2+ intracelular en neutrófilos está asociado a una serie de respuestas celulares, como liberación de gránulos secretorios, síntesis de mediadores proinflamatorios y producción de radicales libres derivados del oxígeno. Este último proceso es dependiente de la activación de NADPH oxidasa, cuya reacción genera 202-+H++NADP+. El exceso de protones generados por esta reacción produce una acidificación intracelular transitoria. Esta es revertida principalmente por la activación de un intercambiador de Na+/H+ (NHE), hasta generar una alcalinización intracelular. La acidificación extracelular y alcalinización intracelular son claves en el proceso de quimiotaxis, puesto que aumentan la vida media del neutrófilo, favorecen la liberación de superóxido, y de metabolitos derivados de lipoxigenasa, lo que finalmente ayuda a intensificar la respuesta inflamatoria aguda. Se aislaron neutrófilos de bovino, en los cuales se midió el aumento intracelular de Ca2+ y los cambios de pH intracelular utilizando las sondas FURA2-AM y BCECF-AM, respectivamente. La medición de superóxido se realizó registrando a 550 nm la reducción de citocromo c en un lector de microplacas. Se concluyó que la estimulación con ionomicina 2μM causa un incremento rápido de Ca2+ citosólico, activando la producción de superóxido en polimorfonucleares. Se observó una acidificación transitoria controlada por la MAPK p38 y una alcalinización sostenida, vía PKC, PI3K Y ERK1/2.
Abstract:
In the present thesis work, the participation of intracellular Ca2+ on the changes of pH and superóxide production in bovine neutrophils, using ionomycin like ionophoro the Ca2+ was evaluated. The increase in intracellular Ca2+ in neutrophils is associated to a series of cellular responses, like release of secretory granules, synthesis of proinflamatory mediators and production of free radicals derived from oxygen. This last process depends on the activation of NADPH oxidase, a reaction that generates 202-+H++NADP+. The excess of protons generated by this reaction produces a transitory intracellular acidification. This is reverted mainly by the activation of an interchanger of Na+/H+ (NHE), till the generation of intracellular alkalinization. The extracellular acidification and intracellular alkalinization are key events in the process of chemotaxis, increase in the life span of neutrophils, they favour the liberation of superoxide and metabolites derived from lipoxigenase, which finally help to intensify the acute inflammatory response. Neutrophils of bovine were isolated, in which the intracellular increase of Ca2+ and the intracellular change of pH was measured using FURA2-AM and BCECF-AM, respectively. The superoxide was measured by registering at 550 nm the reduction of citochrome c in microplate reader. It is concluded that the stimulation with ionomycin 2μM causes a fast increase of cytosolic Ca2+, activating the superoxide production in polymorphonuclears and the induced increase in pH intracellular, with a transitory acidification of MAPK p38 and a maintained alkalinization via PKC, PI3K and ERK1/2.
Palabras Clave:
bovinos; neutrófilos; factor agregante plaquetario
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Sanhueza Silva, Alejandra Maribel
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcs226r/doc/fcs226r.pdf