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Título:
Rol del calcio sobre los cambios de pH intracelular inducido por PAF en neutrófilos de bovino y su relación con la producción de superóxido
Autor:
Riquelme Miranda, Jeanette Praxedes
Profesor Patrocinante:
Burgos Aguilera, Rafael Agustín
Grado a Optar:
Químico Farmacéutico - Licenciado en Ciencias Farmacéuticas
Materia:
bovinos; neutrófilos; factor agregante paquetario
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Química y Farmacia
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
Los neutrófilos cumplen un rol fundamental en los procesos inflamatorios e infecciones bacterianas mediante la generación de radicales superóxido, que ayudan a la destrucción de los patógenos. Una de las sustancias que regulan la actividad del neutrófilo es el factor activante plaquetario (PAF), que causa alcalinización intracelular precedida por un período leve y transitorio de acidificación intracelular. En el presente trabajo se evaluó el rol del calcio intracelular sobre cambios de pH intracelular y la producción de superóxido en neutrófilos de bovino, inducidos por PAF. Para el estudio se utilizaron neutrófilos de bovino. La determinación de calcio y pH intracelular, se realizó por técnicas fluorimétricas, utilizando las sondas FURA-2AM y BCECF-AM, respectivamente. Para la medición de superóxido se utilizó el método de citocromo C reductasa en microplaca. La movilización de calcio inducida por PAF fue reducida por EGTA o BAPTA-AM y completamente bloqueada cuando se usó EGTA más BAPTA-AM. La inhibición de la entrada de calcio redujo la alcalinización inducida por PAF. La producción de superóxido fue inhibida por Gö6850, EGTA, BAPTA-AM y EGTA+BAPTA-AM, no así con SB203580, LY294002 y UO126. Los resultados sugieren que el aumento de calcio intracelular en neutrófilos de bovino es mayoritariamente debido a la entrada de calcio externo, y que este participa en el aumento de pH inducido por PAF. Por otro lado, PAF activaría la producción de superóxido a través de una vía dependiente de PKC, que no sería controlada por PI3K, ERK1/2 o p38.
Abstract:
The neutrophils fulfill a fundamental role in the inflammatory processes and bacterial infections by means of the generation of superoxide radical, which help the destruction of pathogen. One of the substances that regulates the activity of neutrophils is the platelet-activating factor (PAF) that causes intracellular alkalinization preceded by a light and transitory period of intracellular acidification. The present work evaluated the role of intracellular calcium on changes of intracellular pH and superoxide production in neutrophils of bovine, induced by PAF. For the study bovine neutrophils was used. The determination of calcium and intracellular pH, were carried by fluorescence, using FURA-2AM probes and BCECF-AM, respectively. For the measurement of superoxide the method of citocrome C reductase in microplate was used. The mobilization of calcium induced by PAF was reduced by EGTA or BAPTA-AM and totally blocked when EGTA was used BAPTA-AM. The inhibition of the entry of calcium reduced the alkalinization induced by PAF. The superoxide production was inhibited by Gö6850, EGTA, BAPTA-AM and EGTA+BAPTA-AM, but not with SB203580, LY294002 and UO126. The results suggest that the increase of calcium intracellular in neutrophils of bovine is for the most part due to the entry of external calcium, and participates in the pH increase induced by PAF. On the other hand, PAF seems to activate the superoxide production through a dependent pathway of PKC, and would not be controlled by PI3K, ERK1/2 or p38.
Palabras Clave:
bovinos; neutrófilos; factor agregante paquetario
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Riquelme Miranda, Jeanette Praxedes
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcr621r/doc/fcr621r.pdf