Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Localización basolateral del canal de cloruro CIC-2 en líneas celulares epiteliales
Autor:
Peña Müzenmayer, Gaspar Aquiles
Profesor Patrocinante:
Cid S., Pablo
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
canal de cloruro; células epiteliales; absorción de proteínas
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
El canal de cloruro ClC-2 está ampliamente expresado tanto en células epiteliales como en otros tipos celulares. Muchas de las funciones que se le han atribuido en células epiteliales, como participar en la secreción o absorción de fluidos, requieren de su expresión polarizada. En el colon, ClC-2 se expresa basolateralmente en las células del epitelio superficial, sugiriendo un papel en la absorción de fluidos. Sin embargo, existe controversia respecto a la localización subcelular del ClC-2 en células epiteliales. Para resolver este punto se evaluó la polarización del canal recombinante en líneas celulares polarizadas. Las células se crecieron en cubre objetos o filtros permeables y se realizaron transfecciones agudas del canal recombinante fusionado a la proteína fluorescente verde, o marcado con el epítope HA. La confluencia de las células se evaluó por inmunolocalización de la proteína ZO-1 de las uniones estrechas y medición de la resistencia transepitelial. Mediante microscopía confocal se observó que el canal presenta una expresión basolateral en células MDCK, Caco-2 y LLCPK-1 μ1B, mientras que en LLCPK-1 μ1A se observó expresión no polarizada. Se analizaron mutaciones en motivos de direccionamiento basados en tirosinas ó di-leucinas, presentes en ClC-2, y se observó que la mutación de la di leucina 812-813 por alaninas, cambió el direccionamiento basolateral de ClC-2 a una localización apical en células MDCK. Estos resultados permiten concluir que ClC-2 es un canal basolateral en líneas celulares polarizadas y que en dicho direccionamiento participan un motivo de di leucina, presente en extremo carboxilo terminal del canal, y la proteína μ1B del complejo adaptador de clatrina AP-1.
Abstract:
The chloride channel ClC-2 is widely expressed in epithelial cells and other cells types. Many of the functions that have been attributed to ClC-2 in epithelial cells, such as a participation in fluid secretion or absorption, require a polarized expression. In the colon, ClC-2 is expressed basolaterally in cells of the surface epithelium, suggesting a role in fluid absorption. There is, however, controversy about the subcellular localization of ClC-2 in epithelial cells. To resolve this controversy, we have assessed the polarization of recombinant channel in polarized cell lines. Cells were grown upon glass coverslips or permeable membranes, and transient transfections were done with the recombinant channel fused to green fluorescence protein or HA tagged. The confluence of cells was assessed by immunolocalization of the tight junction protein ZO-1 and by measuring transepithelial resistance. Confocal microscopy revealed that the channel has a basolateral expression in MDCK, Caco-2 and LLCPK1 μ1B cells, while in LLCPK1 μ1A there was no polarized expression. We analyzed mutations of potential targeting motifs based in tyrosine or di-leucine. Mutation of di-leucine 812-813 to di-alanine changed the basolateral targeting of ClC-2 to an apical location in MDCK cells. These results allow us to conclude that ClC-2 is a basolateral channel in polarized cell lines. A di-leucine motif within the C-terminus of channel directs its targeting which requires the μ1B protein subunit of clathrin adaptor complex AP-1.
Palabras Clave:
canal de cloruro; células epiteliales; absorción de proteínas
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Peña Müzenmayer, Gaspar Aquiles
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcp419l/doc/fcp419l.pdf