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Título:
Rol de MAPK-NF-kB sobre el aumento de la expresión de COX-2 en células HL-60 diferenciadas a neutrófilos activadas con PAF y fMLP
Autor:
Igor Flores, Jessica Loreto
Profesor Patrocinante:
Burgos Aguilera, Rafael Agustín
Grado a Optar:
Químico Farmacéutico - Licenciado en Ciencias Farmacéuticas
Materia:
neutrófilos; factor agregante plaquetario; células HL-60; fosforilación
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Química y Farmacia
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
En este trabajo se estudió el efecto de fMLP y PAF sobre la expresión de COX-2 y la posible participación de la vía MAPK-NF-κB. Para este propósito se utilizaron células de la línea HL-60 diferenciadas a neutrófilos. Para demostrar la diferenciación se midió la movilización de [Ca++]i por espectrofluorescencia utilizando la sonda Fura-2AM, inducida por PAF y fMLP, además de la reducción de NBT. Posteriormente, las células HL-60 diferenciadas fueron estimuladas con PAF y fMLP para demostrar la activación de MAPK, la expresión de COX-2 y degradación de IκBα. Algunos experimentos fueron realizados en presencia de inhibidores de MAPK, PI3K, NF-κB. Se analizó por western blot la fosforilación de las proteínas ERK1/2, p38, degradación de IκBα, y expresión de COX-2. Se observó que fMLP y PAF fosforilaron a las proteínas ERK1/2 y p38, que los dos estimulantes tienen la capacidad de activar NF-κB y de expresar COX-2. Se concluyó que la vía MAPK ERK1/2 controla la expresión de COX-2 en células HL-60 diferenciadas estimuladas con fMLP. Por su parte, PAF induce expresión de COX-2 a través de la ruta MAPK p38. Por último, la expresión de COX-2 inducida por PAF, esta regulada fuertemente por la activación de NF-κB, pero parece probable que existen otros factores de transcripción para regular la expresión de COX-2 cuando las células son activadas con fMLP.
Abstract:
In this work the effect of fMLP and PAF on the expression COX-2 and the participation of the MAPK-NF-κB pathway was studied. For this purpose cells of the line HL-60 differentiated to neutrophils were used. To demostrate differentiation, the movilization of [Ca++]I was measured by spectrofluorescene using the Fura-2AM probe induced by PAF and fMLP, and reduction of NBT. Then, the differentiated cells HL-60 were stimulated with PAF and fMLP to demostrate the activation of MAPK, COX-2 expression, and IκBα degradation. Some experiments were achieved in presence of inhibitors of MAPK, PI3K, NF-κB, and the phophorylated of the proteins ERK1/2, p38, IκBα degradation and COX-2 expression were analyzed by western blot. It was observed that fMLP and PAF phosphorylated the ERK1/2 and p38 proteins, and have the ability to activate NF-κB and express COX-2. The fMLP and PAF pathway ERK1/2 MAPK controls the COX-2 expression in cells differentiated HL-60 stimulated with fMLP on the other hand PAF induces COX-2 expression through the p38 MAPK route. Finally, the expression of COX-2 induced by PAF, is significantly regulated by the activation of NF-κB, however, it is probable that other transcription factors regulate also the expression COX-2 when the cells are activated by fMLP.
Palabras Clave:
neutrófilos; factor agregante plaquetario; células HL-60; fosforilación
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Igor Flores, Jessica Loreto
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fci.24r/doc/fci.24r.pdf