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Título:
Análisis de la contribución de las apolipoproteínas A-I y A-II en la actividad amtimicrobiana de HDL del pez Cyprinus carpio
Autor:
Castro Parada, Karina Paola
Profesor Patrocinante:
Concha Grabinger, Margarita Inés
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
apolipoproteínas; cromatografía; respuesta inmune
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que la lipoproteína de alta densidad (HDL) es la proteína más abundante en el plasma de la carpa (Cyprinus carpio), y presenta una potente actividad antimicrobiana in vitro. Para evaluar la contribución de sus apolipoproteínas mayoritarias (apoA-I y apoA-II) en esta función defensiva, se las purificó desde el plasma de carpa a través de dos etapas cromatográficas que involucran, cromatografía de afinidad y filtración en gel. Ambas apolipoproteínas mostraron actividad bactericida y/o bacteriostática en el rango micromolar, en un ensayo de dilución en microplaca, contra diversas bacterias susceptibles, incluyendo patógenos de peces. Se sabe que varios péptidos antimicrobianos son producidos por proteólisis parcial de proteínas precursoras inactivas. En este contexto, el péptido sintético derivado de la región C-terminal de apoA-I de carpa, también demostró actividad antimicrobiana (EC50= 3-6 µM) contra Planococcus citreus, sin un efecto hemolítico detectable. Adicionalmente, mediante ensayos de difusión radial, éste péptido fue capaz de potenciar la actividad antimicrobiana de la lisozima, a concentraciones subinhibitorias para ambos efectores. Finalmente, in vitro se generó un fragmento truncado mayoritario a partir de apoA-I asociada a HDL sometida a proteólisis limitada con quimotripsina, lo que sugiere que péptidos con actividad bactericida pueden ser liberados desde apoA-I in vivo. Los resultados obtenidos sugieren fuertemente que estas proteínas podrían actuar como efectores importantes de la inmunidad innata de peces teleósteos, tanto a nivel sistémico como en mucosas.
Abstract:
Previous studies in our laboratory showed that high density lipoprotein (HDL) is the most abundant protein in the carp (Cyprinus carpio) plasma and displays antimicrobial activity in vitro. To evaluate the contribution of its major apolipoproteins (apoA-I y apoA-II) in this defensive role, they were isolated from the carp plasma by two chromatographic steps, involving affinity and gel filtration chromatography. Both apolipoproteins showed bactericidal and/or bacteriostatic activity in the micromolar range in a microplate dilution assay, against several susceptible bacteria, including fish pathogens. It is known that several antimicrobial peptides are produced by partial proteolysis from inactive precursor proteins. In this context, the synthetic peptide derived from the C-terminal region of carp apoA-I also demonstrated antimicrobial activity (EC50= 3-6 µM) against Planococcus citreus, without detectable haemolytic effect. Additionally, this peptide was able to enhance the antimicrobial activity of lysozyme at sub-inhibitory concentrations of both effectors, in radial diffusion assays. Finally, in vitro a major truncated fragment was generated from HDLassociated apoA-I after limited proteolysis with chymotrypsin, which suggests that apoA-I peptides could be liberated in vivo. These results strongly suggest that these proteins could act as important effectors of innate immunity in teleost fishes, both at systemic and mucosal level.
Palabras Clave:
apolipoproteínas; cromatografía; respuesta inmune
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Castro Parada, Karina Paola
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcc355a/doc/fcc355a.pdf