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Título:
Caracterización del efecto del ácido metil 2,5- dihidroxicinámico sobre el transportador de hexosas glut-1
Autor:
Bergmann Muñoz, Wally Rocio
Profesor Patrocinante:
Reyes Pinto, Alejandro Mauricio
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
transporte biológico; proteínas transportadoras; glucosa
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
GLUT1 es un transportador facilitativo de hexosas, ampliamente distribuido en diversos tipos celulares y especialmente abundante en eritrocitos humanos, cuya actividad es modificada por una serie de compuestos caracterizados como inhibidores de tirosina quinasas (Vera et al. Biochemistry 40, 777, 2001). Entre estos destaca el ácido 2,5- metildihidroxicinámico (MHC), un análogo sintético de erbstatina , el que es un producto natural de Actinomycetes. Nuestro estudio se ha centrado en averiguar de qué manera el ácido 2,5-metildihidroxicinámico interactúa con el transportador y cómo modifica su actividad. Para ello hemos realizado un análisis cinético detallado del transporte de análogos de D-glucosa usando condiciones de entrada, salida y de intercambio en equilibrio en eritrocitos humanos. Se ensayó la salida de D-glucosa en condiciones trans-cero y cis-infinito (ensayos de Sen – Widdas). En todas estas condiciones MHC fue un inhibidor eficaz, con valores de IC50 entre 150-750 μM. Nosotros encontramos queen condiciones de equilibrio y de salida la inhibición fue competitiva, mientras que en los ensayos de entrada fue de tipo incompetitiva. Las determinaciones en ensayos cis-infinito mostraron que el inhibidor no afecta la unión de D-glucosa a su sitio externo. Por otro lado, ensayos de desplazamiento con citocalasina B unida a GLUT1 en membranas de eritrocitos indican que MHC se une de manera directa al transportador y que lo haría de manera competitiva. Nuestros resultados son compatibles entonces con la unión del inhibidor a un sitio accesible por la cara interna (endofacial) del transportador.
Abstract:
GLUT1 is a facilitative hexose transporter highly expressed in diverse cell types and especially abundant in human erythrocytes, whose activity is be modified by a variety of compounds characterized as tyrosine kinase inhibitors (Vera et al. Biochemistry 40, 777, 2001). Between them resalts the methyl 2,5- dihydroxycinnamic acid (MHC), a synthetic analog of erbstatin, which is a natural product of Actinomycetes. Our investigation centers on the way in which MHC interacts with the transporter and how it modifies transporter activity. To do this we have performed a detailed analysis of the transport of D-glucose analogs in human erythrocytes using conditions of influx, eflux and exchange at equilibrium. We also tested the exit of D-glucose in zero-trans and infinite-cis conditions (Sen – Widdas assays). In every case MHC was an excellent inhibitor with IC50 values between 150-750 μM. We found that in equilibrium and efflux conditions the inhibition was competitive, while in influx conditions it was uncompetitive. The results from infinite-cis assays shown that the inhibitor does not affect the binding of D-glucose to its external binding site. On the other side displacement assays with cytochalasin B bound to GLUT1 indicates that the MHC binds directly to the transporter and it does in a competitive fashion. Our results are consistent with the binding of the inhibitor to a site accessible by the inner endofacial face of the transporter.
Palabras Clave:
transporte biológico; proteínas transportadoras; glucosa
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Bergmann Muñoz, Wally Rocio
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcb499c/doc/fcb499c.pdf