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Título:
Análisis de la expresión y actividad antimicrobiana de apolipoproteina A-I de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss)
Autor:
Bastías Barrientos, Adriana del Carmen
Profesor Patrocinante:
Concha Grabinger, Margarita Inés
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
genética microbiana; apolipoproteinas; inmunidad celular
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
Previamente se demostró que en Cyprinus carpio (carpa), la lipoproteína de alta densidad (HDL) y sus apolipoproteínas mayoritarias, apoA-I y apoA-II presentan una potente actividad antimicrobiana in vitro. Considerando que HDL es una de las proteínas plasmáticas más abundantes en los peces teleósteos, esta actividad antimicrobiana jugaría un rol importante en la inmunidad innata sistémica. Adicionalmente, se había demostrado la presencia de HDL y sus apolipoproteínas tanto en el mucus como en la epidermis de carpa, sugiriendo que también podrían actuar en esta importante barrera defensiva. Debido a la importancia del cultivo de especies salmonídeas en el país, se evaluó la función defensiva de HDL en trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). Resultados obtenidos por inmunohistoquímica y RT-PCR indican la expresión de apoA-I en piel, intestino y posiblemente mucosa bucal, todos ellos tejidos relevantes para la inmunidad innata puesto que constituyen rutas importantes de acceso para los patógenos. La apoA-I de trucha fue purificada optimizando el procedimiento desarrollado para la carpa, que involucra cromatografía de afinidad y de filtración en gel. ApoA-I mostró actividad antimicrobiana en ensayos de dilución en microplaca empleando diversas bacterias susceptibles, incluidos patógenos causantes de enfermedad en truchas. En todos los casos se obtuvieron valores de ECB50B en el rango micromolar. Adicionalmente, estudios de proteólisis in vitro de apoA-I asociada a HDL, con quimotripsina, sugieren que péptidos liberados desde apoA-I también pueden participar en inmunidad innata. Estos resultados refuerzan la idea que éstas proteínas que corresponden efectores importantes de la inmunidad innata de peces teleósteos tanto a nivel sistémico como en mucosas.
Abstract:
We had previously shown that in Cyprinus carpio (carp), the high density lipoprotein (HDL) and its major apolipoproteins, apoA-I and apoA-II, display strong antimicrobial activity in vitro. Considering that HDL is one of the most abundant plasma proteins in teleost fish, this antimicrobial activity would play an important role in the systemic innate immunity. Additionally we had demonstrated the presence of HDL and its apolipoproteins both in the carp mucus and in the epidermis, suggesting they could also act in this important defensive barrier. Due to the importance of the culture of salmonid species in the country, the defensive function of HDL was evaluated in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). The results obtained by inmunohistochemistry and RT-PCR indicated the expression of apoA-I in skin, intestine and possibly oral mucosa, all relevant tissues for the innate immunity since they constitute important routes for the entry of pathogens. ApoA-I was purified optimizing the procedure developed for carp apoA-I that involves affinity and gel filtration chromatography. ApoA-I showed antimicrobial activity in a microplate dilution assay using several susceptible bacteria, including pathogens causing disease in trouts. In all cases ECB50 Bvalues in the micromolar range were obtained. In addition, in vitro proteolysis studies of HDL-associated apoA-I, with chymotrypsin, suggest that peptides liberated from could also be involved in innate immunity. These results reinforce the idea that these proteins correspond to relevant effectors of the innate immunity of teleosts fish both at systemic and mucosal levels.
Palabras Clave:
genética microbiana; apolipoproteinas; inmunidad celular
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Bastías Barrientos, Adriana del Carmen
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fcb326a/doc/fcb326a.pdf