Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Empleo de cultivos organotípicos de piel para el estudio de los mecanismos moleculares que regulan el crecimiento y la diferenciación de la epidermis humana
Autor:
Arias Cea, María Elena
Profesor Patrocinante:
Concha Murray, Miguel Luis
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
fibroblastos; técnicas histológicas; cultivos bacteriológicos
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2005
Resumen:
Diversas evidencias indican que los fibroblastos participan en la inducción de la diferenciación epidérmica mediante un mecanismo secretorio paracrino doble dependiente de la interacción funcional entre queratinocitos y fibroblastos. Por otra parte, se ha observado que los factores de transcripción nuclear AP-1 y NFκB participan en la inducción de la diferenciación de los queratinocitos humanos. En esta Tesis de se investigó si la activación de AP-1/c-Jun y NFκB/p50 y Egr-1 durante la diferenciación epidérmica depende o no de los fibroblastos. Con este objetivo se prepararon cultivos organotípicos de piel con matrices de colágeno tipo I, pobladas o no con fibroblastos dérmicos y cubiertas con células HaCaT o queratinocitos humanos normales. La morfogénesis del tejido obtenido fue estudiada a diferentes lapsos de tiempo con técnicas histológicas convencionales la expresión de diversos marcadores de la proliferación y diferenciación celular se analizó con inmunohistoquímica y la formación de la membrana basal con histoquímica, inmunohistoquímica y microscopía electrónica de transmisión. La expresión de los factores de transcripción nuclear AP-1/c-Jun, NFkB/p50 y Egr-1 se estudió con inmunohistoquímica. Los resultados obtenidos revelaron que la morfogénesis epidérmica es el resultado de la combinación crítica de matriz extracelular colonizada por fibroblastos, y de queratinocitos en proliferación en su superficie. Más importante aún, nuestros resultados sugieren por primera vez que los fibroblastos participan en la diferenciación del queratinocito induciendo en estos la expresión y translocación nuclear de los factores de transcripción AP-1/c-Jun NFkB/p50 y Egr-1 y, simultáneamente, la estratificación epidérmica. Es muy probable que este efecto dependa de productos secretorios producidos por los fibroblastos.
Abstract:
Recent studies demonstrate that fibroblasts actively control epidermal differentiation by means of a double paracrine mechanism dependent of keratinocyte and fibroblast crosstalking. In addition, it has been observed that both transcription factors AP-1 and NFkB play a role in the induction of human keratinocyte differentiation. In this Thesis we investigate if AP-1/c-Jun, NFkB/p50 and Egr-1 activation induced during the epidermal differentiation depends or not on fibroblasts. With this aim, organotypic cultures of skin were produced using matrices of collagen type I, settled or not with dermal isolated fibroblasts and covered with HaCaT cells or normal human keratinocytes. Morfogenesis of the neoepidermis was analysed at different time intervals with conventional histological techniques; cellular proliferation and differentiation markers by immunohistochemistry; and basal membrane formation by means of histochemistry, immunohistochemistry and transmission electronic microscopy. Expression of transcription factors AP-1/c-Jun, NFkB/p50 and Egr-1 was analysed using inmunohistochemistry. The results obtained confirmed that epidermal morphogenesis is the product of the critical combination of extracellular matrix colonized by fibroblasts, and keratinocytes proliferating on its surface. More important, our results suggest for the first time that fibroblasts regulate keratinocyte differentiation inducing the expression and nuclear translocation of transcription factors AP-1/c-Jun, NFkB/p50 and Egr-1, and simultaneously epidermal stratification. This effect could be mediated by fibroblast secretory factors.
Palabras Clave:
fibroblastos; técnicas histológicas; cultivos bacteriológicos
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Arias Cea, María Elena
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fca696e/doc/fca696e.pdf