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Título:
Distribución de las enzimas aldolasa A y fructosa-1,6-bisfosfatasa muscular en distintos tejidos de rata
Autor:
Spichiger Bruce, Carlos Eugenio
Profesor Patrocinante:
Slebe T., Juan C.
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
Fructosa-1,6-Bisfosfatasa; enzimas; ADN
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
La fructosa-1,6-bisfosfato aldolasa (aldolasa) cataliza la conversión reversible de fructosa-1,6-bisfosfato en gliceraldehido-3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato. Aldolasa en mamíferos se presenta como tres isoenzimas: las isoformas muscular (A), hepática (B) y cerebral (C). Resultados de nuestro laboratorio han demostrado que aldolasa B colocaliza con fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) en los túbulos epiteliales proximales de riñón y en los hepatocitos de la zona periportal. En esta tesis se estudió la localización celular y subcelular, para la isoenzima A, en tejidos de rata. Para determinar la localización de aldolasa A, se prepararon anticuerpos policlonales en conejo. Se encontró inmunotinción positiva en hígado, testículo, intestino delgado, estómago, páncreas, músculo esquelético y cardiaco de rata. Mediante microscopía confocal se encontró que aldolasa A tiene una localización subcelular nuclear en músculo cardiaco, espermatogonias y células de Kupffer. Por otra parte, se clonó la FBPasa muscular de rata en el vector pEGFP C1, y se realizaron estudios de localización de esta isoenzima fusionada a la proteína verde fluorescente (GFP) en la línea celular A-10 (derivada desde músculo liso de aorta de rata). Se encontró que la enzima fusionada se localiza en el citoplasma, tanto en ausencia, como en presencia de distintas concentraciones de (glucosa 5 mM y 25 mM). Estos datos señalan que la localización de esta enzima es dependiente de las características metabólicas del tejido y tipo celular, además su localización subcelular podría desempeñar un papel importante en su regulación.
Abstract:
La fructosa-1,6-bisfosfato aldolasa (aldolasa) cataliza la conversión reversible de fructosa-1,6-bisfosfato en gliceraldehido-3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato. Aldolasa en mamíferos se presenta como tres isoenzimas: las isoformas muscular (A), hepática (B) y cerebral (C). Resultados de nuestro laboratorio han demostrado que aldolasa B colocaliza con fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) en los túbulos epiteliales proximales de riñón y en los hepatocitos de la zona periportal. En esta tesis se estudió la localización celular y subcelular, para la isoenzima A, en tejidos de rata. Para determinar la localización de aldolasa A, se prepararon anticuerpos policlonales en conejo. Se encontró inmunotinción positiva en hígado, testículo, intestino delgado, estómago, páncreas, músculo esquelético y cardiaco de rata. Mediante microscopía confocal se encontró que aldolasa A tiene una localización subcelular nuclear en músculo cardiaco, espermatogonias y células de Kupffer. Por otra parte, se clonó la FBPasa muscular de rata en el vector pEGFP C1, y se realizaron estudios de localización de esta isoenzima fusionada a la proteína verde fluorescente (GFP) en la línea celular A-10 (derivada desde músculo liso de aorta de rata). Se encontró que la enzima fusionada se localiza en el citoplasma, tanto en ausencia, como en presencia de distintas concentraciones de (glucosa 5 mM y 25 mM). Estos datos señalan que la localización de esta enzima es dependiente de las características metabólicas del tejido y tipo celular, además su localización subcelular podría desempeñar un papel importante en su regulación.
Palabras Clave:
Fructosa-1,6-Bisfosfatasa; enzimas; ADN
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Spichiger Bruce, Carlos Eugenio
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcs754d/doc/fcs754d.pdf