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Título:
Participación de receptores B1 y B2 de cininas en la regulación de la proliferación y diferenciación de células epidérmicas humanas
Autor:
Sánchez Leal, Tamara Macarena
Profesor Patrocinante:
Figueroa Valverde, Carlos Darío
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biológicas
Materia:
inmunocitoquímica; cininas; queratinocitos; epidermis
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
Las cininas forman parte de una familia de hormonas peptídicas que se generan y actúan localmente. Sus efectos biológicos, involucran la activación de receptores específicos de membrana acoplados a proteína G, conocidos como B1 y B2. El tipo B2 es expresado constitutivamente por varios tipos celulares, incluyendo los queratinocitos humanos, en cambio el tipo B1 es sobre-expresado durante inflamación, especialmente cuando aumentan los niveles de IL-1β, o existe presencia de lipopolisacáridos bacterianos. La activación del receptor B1 es mediada por los agonistas des[Arg9]-bradicinina, des[Arg9]-Lis-bradicinina y BK1-5. La activación del receptor B2 es mediada por bradicinina y Lis-bradicinina. En esta tesis se investigó si la activación de receptores B1 y B2 resultaba en proliferación y/o diferenciación del queratinocito, y si su activación junto con la del receptor de EGF potencia o inhibe sus efectos sobre la proliferación del queratinocito. La síntesis de DNA se midió mediante ELISA, utilizando el análogo de timina, BrdU. La diferenciación se determinó mediante inmunocitoquímica, pesquisando proteínas (CK10 y profilagrina), que se expresan en diferentes etapas de la diferenciación del queratinocito. Los cultivos se estimularon con diferentes concentraciones de los agonistas B1 y B2. En otros experimentos se utilizó, además, IL-1β y diclofenaco sódico, para sobre-expresar el receptor B1 e inhibir la síntesis de prostaglandinas. La estimulación con ambos tipos de agonistas, tras el uso de IL-1β y diclofenaco sódico, sobre-expresó los receptores B1, pero no estimuló la proliferación celular. Por el contrario, se observó una diferenciación moderada cuando se usó el gonista del receptor B2, e intensa con los agonistas de tipo B1, siendo con BK1-5, levemente mayor. Cuando se utilizó EGF 10 nM junto a LDBK (100 y 1000 nM), la proliferación celular fue mayor a la inducida por EGF sólo. Por lo tanto, la activación de los receptores de cininas en queratinocitos humanos, estimula su diferenciación, la cual depende del receptor estimulado, y del agonista utilizado. Además, LDBK potencia el efecto de EGF sobre la proliferación de los queratinocitos.
Abstract:
Kinins belong to a hormone peptide family, which are produced and act locally. The biological effects caused by these peptides comprise the activation of specific receptors coupled to G protein, called B1 y B2. Several cells models, constitutively express the B2 receptor subtype including human keratinocytes, but the B1 subtype is over-expressed during inflammation, specially when IL-1β levels are increased, or bacterian lipopolysacharides exist. The B1 receptor is activated by des[Arg9]-bradykinin, des[Arg9]-Lis-bradykinin and BK1-5. The activation of B2 receptors is mediated by bradykinin and Lis-bradykinin. The aim of this work was to investigate the role of kinin B1 and B2 receptors in keratinocyte proliferation and/or differentiation. DNA synthesis was measured by ELISA, using the thymidine analog, BrdU. Differentiation was determined by immunocytochemistry to assess the expression of keratin 10 and proffilagrin that are expressed at different states of keratinocyte differentiation. Cultures were stimulated with different doses of B1 and B2 agonists. A pre-incubation with IL-1β and Diclofenac Sodium was performed, in some experiments, to over-express B1 receptors and to inhibit prostaglandins synthesis, respectively. These treatment over-expressed B1 receptors, but this increase did not result in an augment of cell proliferation. Stimulation by B2 agonist did not increase cellular proliferation, but induced a moderated differentiation. Both B1 agonists used provoked cell differentiation, but it was slightly higher with BK1-5 than with des[Arg9]-Lis-bradykinin. Nevertheless, cells stimulated with EGF and des[Arg9]-Lis-bradykinin, increased cell proliferation to higher levels than that produced by EGF alone. Therefore, kinin receptor activation stimulate keratinocyte differentiation, which depends on the receptor subtype and the agonist used. Finally, the B1 agonist des[Arg9]-Lis-bradykinin potentiates the response of EGF on keratinocyte proliferation.
Palabras Clave:
inmunocitoquímica; cininas; queratinocitos; epidermis
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Sánchez Leal, Tamara Macarena
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcs211p/doc/fcs211p.pdf