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Título:
Modulación de Task-2 por la acidificación extracelular y posible papel en la regulación del volumen celular
Autor:
Montenegro Venegas, Carolina Aida
Profesor Patrocinante:
Barros O., Felipe
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
células genética; acidificación; regulación genética
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
Se ha sugerido que los canales de potasio tipo TASK, mediarían el proceso de disminución regulada de volumen (RVD) y participarían también en la disminución apoptótica de volumen (AVD). Como este canal es inhibido por acidosis extracelular, es posible que el efecto antiapoptótico de la acidosis se deba a una inhibición de TASK y de la AVD. El presente trabajo reúne experimentos destinados a evaluar el papel de TASK-2 y su sensibilidad a pH en la RVD y AVD. La transfección aguda de células HeLa nativas con mTASK-2 aceleró la RVD desde un t1/2 11,1±0,1 minutos a un t1/2 3,9±0,2 minutos pH 7,5 (células transfectadas), siendo el efecto inhibido a pH 6,0 y acelerado a pH 8,5. En presencia de clofilio pH 7,5, un bloqueador de las corrientes de potasio mediadas por mTASK-2, la RVD fue inhibida. Estos resultados concuerdan con mediciones electrofisiológicas de la actividad de TASK-2. Además, se llevaron a cabo estudios preliminares de AVD en células HeLa nativas expuestas a 2 μM de estaurosporina, mediante la utilización de un programa de reconstrucciones en 3D. Después de 15 minutos de exposición a la droga las células comenzaron a realizar una AVD rápida, llevándolas finalmente a una reducción en volumen de un 25% con respecto a su volumen original. Como la corriente emitida por este canal es alterada por el pH extracelular, se efectuaron mutagénesis sitio-dirigidas de posibles residuos aminoacídicos implicados como los sensores de pH. Se sugiere la participación de la tirosina 219, ya que su mutación cambió en forma significativa el pKa del efecto del pH extracelular sobre las corrientes de K+del canal TASK-2.
Abstract:
It has been suggested that the potassium channel TASK would mediate in the process of RVD (regulated volume decrease) and would participate in the apoptotic volume decrease (AVD) as well. Since this channel is inhibited by extra-cellular acidosis, it is likely that the antiapoptotic effect of acidosis occurs due to an inhibition of TASK and AVD. This work gathers experiments to evaluate the role of TASK-2 and their sensitivity to the RVD and AVD. The acute transfection of native HeLa cells with mTASK-2 accelerated the RVD from a t1/2 11.1±0.1minutes to a t1/2 3.9±0.2 minutes pH 7.5 (transfected cells); the effect was inhibited at pH 6.0 and accelerated at pH 8.5. In the presence of clofilium pH 7.5, a blocker of potassium currents mediated by TASK-2, RVD was inhibited. These results agree with the electrophysiological measurements of the activity of TASK-2. By using a 3-D reconstruction program, we made preliminary-AVD studies in native HeLa cells exposed to 2μM of staurosporine. After 15 minutes of exposure to the drug, the cells carried out a rapid AVD that led finally to a reduction of 25% in relation to their original volume. As the activity of the current is altered by the extra-cellular pH, we carried out site–directed mutagenesis of the possible aminoacidic residues involved in the pH-sensing. We suggest the participation of tyrosine Y219, because its mutation changed the pKa of the effect of the extra-cellular pH upon the TASK-2 potassium channel current significantly.
Palabras Clave:
células genética; acidificación; regulación genética
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Montenegro Venegas, Carolina Aida
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcm777m/doc/fcm777m.pdf