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Título:
Expresión de los antígenos TBPB y Pora de Neisseria meningitidis en la cepa vacuna Salmonella entérica serovar Typhimurium x4550 y evaluación de respuesta inmune en ratones vacunados oralmente
Autor:
Canales Soto, Ana Isabel
Profesor Patrocinante:
León, Gloria
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
antígenos; vacuna contra salmonella entérica serova
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
Neisseria meningitidis es el principal agente etiológico de la meningitis a nivel mundial y nacional. La falta de una vacuna apropiada contra el meningococo tipo B ha impulsado el estudio de proteínas, con la finalidad de obtener una vacuna eficiente. Entre éstas, se escogió TbpB y PorA, ya que ambas inducen anticuerpos bactericidas. Existe amplia información sobre utilización de cepas atenuadas de Salmonella para inducir una respuesta inmune eficiente contra antígenos heterólogos recombinantes, generando respuestas celular y humoral, deseables en una vacuna oral viva. Nuestro interés radicó en expresar los antígenos TbpB y PorA en la cepa vacuna Salmonella typhimurium χ4550, con la finalidad de evaluar, en un modelo murino, la utilidad de éstos para el desarrollo de una vacuna oral viva contra N. meningitidis. Para la expresión de los genes heterólogos en Salmonella se utilizó un sistema plasmidial dual letal balanceado. La expresión de los antígenos foráneos en cultivos de Salmonella se demostró por Western blot. Se seleccionaron los clones recombinantes más eficientes de S. typhimurium χ4550 y con ellos se inmunizaron ratones BALB/c por vía oral. Se tomaron muestras de sangre, heces y saliva y se determinó, mediante ELISA, los niveles séricos de IgG e IgA en heces y saliva. Estos estudios también fueron útiles para estimar la eficiencia de colonización de órganos por la cepa vacuna. Finalmente, se realizaron ensayos bactericidas utilizando sueros de los ratones inmunizados demostrándose la existencia de una actividad significativa. Los datos sugieren que TbpB puede ser mejor antígeno que PorA, para el desarrollo de una vacuna oral viva contra N. meningitidis al considerar su potencial en la inducción de anticuerpos bactericidas.
Abstract:
N. meningitidis is the main etiological agent causing meningitis locally and worldwide. Since an appropriate vaccine against meningococcus B is not available, research has been focused on proteins with immuno-protective properties, with the purpose of designing an efficient vaccine. Among these proteins we selected TbpB and PorA, since both induce bactericidal antibodies when applied intraperitoneally. Extensive Salmonella literature supports the use of attenuated strains to induce an efficient immune response when recombinant antigens are expressed, generating cellular and humoral responses, both desirables in oral live vaccine. Thus, we expressed the TbpB and PorA antigens in the vaccine strain Salmonella typhimurium χ4550, and evaluated, on a murine model, the immuno-protective capabilities of these antigens for the development of an oral live vaccine against N. meningitidis. Antigen expression was obtained using a dual plasmid lethal balanced system. The expression of the antigens was demostrated by Western blot, and the clones with higher expression were selected and used for immunization of BALB/c mice by oral via. Blood, feces and saliva samples were taken, and the level of IgG in the sera and IgA in feces and saliva were determined by means of ELISA. Also, these studies were useful to estimate the organ colonization efficiency of the vaccine strain. In addition, bactericidal tests were carried out using sera from immunized mice and a significant activity against N. meningitidis was detected.According to the results, based on the bactericidal activities it is suggested that TbpB can be a better candidate than PorA for its use in the development of an oral live vaccine against N. meningitidis.
Palabras Clave:
antígenos; vacuna contra salmonella entérica serova
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Canales Soto, Ana Isabel
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcc212e/doc/fcc212e.pdf