Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Función de los extremos carboxilo y amino terminales de fructosa-1,6-bisfosfatasa de riñón de cerdo en su localización celular
Autor:
Calderón Calderón, Freddy Andrés
Profesor Patrocinante:
Yáñez C., Alejandro J.
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
fructosa-1,6-bisfosfatasa; cerdos; riñon
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
La regulación de la glicólisis y la gluconeogénesis es extremadamente importante y compleja en tejido hepático y renal. Se ha demostrado que la distribución subcelular de algunas enzimas glicolíticas es dinámica y responde a las condiciones metabólicas. Nuestro laboratorio estableció que FBPasa se encuentra en el citoplasma, en un compartimento en el polo apical, e interesantemente dentro del núcleo de algunas células de hígado y riñón de rata. Esta ubicación podría explicarse por la presencia de una secuencia de localización nuclear (NLS) o de una interacción proteína-proteína que module la localización subcelular a través de un mecanismo denominado “piggy-back”. En base a estos antecedentes planteamos que: “la función de la fructosa-1,6-bisfosfatasa es regulada por modulación de su localización subcelular por metabolitos intermediarios, y que dicha localización es dependiente de la presencia de señales de localización en la estructura primaria de la enzima”. Para evaluar esta hipótesis clonamos dos mutantes de FBPasa de riñón de cerdo en el vector pEGFP, para obtener la proteína de fusión que fue expresada en líneas celulares renales. FBPasa-GFP fue localizada solo en el citosol de las celulas HEK-293, pero en las células LLC-PK1 la enzima fue capaz de translocar al núcleo. Esta diferente localización dependiente de las líneas celulares usadas, sugiere que la interacción proteína-proteína es un mecanismo plausible de regulación de la localización de FBPasa. También sugerimos que FBPasa contiene dos secuencias, una importante para la exportación de FBPasa desde el núcleo al citosol y otra secuencia para la importación de FBPasa al núcleo. Interesantemente, FBPasa estuvo presente principalmente en el citoplasma de LLC-PK1, pero la adición de glucosa induce la translocación a el núcleo. Estos resultados indican que la localización subcelular de FBPasa es modulada por la acción de glucosa.
Abstract:
Regulation of glycolysis and gluconeogenesis is extremely important and complex in renal and hepatic tissues. It has been demonstrated that the subcellular distribution of some glycolitic enzymes is dynamic and responds to metabolic conditions. Our laboratory established that FBPase is found in the cytoplasm, in a compartment in the apical pole, and interestingly inside the nuclei in some cells in liver and rat kidney. This location could be attributed to a presence of a nuclear localization signal (NLS) or to a protein-protein interaction that modulate the subcellular location through a mechanism denominated “piggy-back”. Based on these antecedents we outline that: “The function of the fructose-1,6-bisfosphatase is regulated by de modulation of their subcellular localization exerted by intermediary metabolites and that this location is dependent of the presence of signals of localization in the primary structure of the enzyme”. To evaluate this hypothesis, we have cloned two mutants FBPase of pig kidney in the vector pEGFP to obtain the fusion proteins which was expressed in renals lines cells. We have found interesting results that point to the interaction protein-protein like mechanism of the regulation of the localization, involved at the two ends of the enzyme, one in the export to the cytosol and another in the import to the same organelle. Also, we observed that the wild type FBPase answer to the concentration changes of glucose in the medium, altering her subcellular location by the presence of the sugar.
Palabras Clave:
fructosa-1,6-bisfosfatasa; cerdos; riñon
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Calderón Calderón, Freddy Andrés
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcc146f/doc/fcc146f.pdf