Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Estudio del ciclo replicativo de hantavirus Andes
Autor:
Barría Matus, Marcelo Alejandro
Profesor Patrocinante:
Ramírez V., Eugenio
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biológicas
Materia:
hantavirus; replicación viral; virus andes
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
Los Hantavirus son virus pertenecientes a la familia Bunyaviridae causantes del Síndrome Cardiopulmonar por Hantavirus (SCPH). Los primeros casos en América se reportaron en el año 1993 en los Estados Unidos, detectándose más de un centenar de casos con una letalidad del 30 al 40% causados por el virus Sin Nombre. A partir de 1996 se han diagnosticado 370 casos de SCPH en Chile, generados por el virus Andes. Hasta el momento no existe información sobre el ciclo replicativo de este virus. Los objetivos de esta tesis fueron caracterizar la síntesis in vitro de los RNAs y las proteínas del virus Andes, y evaluar el efecto de antivirales en el ciclo infectivo. Se infectaron células Vero E6 con virus Andes con un MOI de 0,1 y 2,5 pfu, deteniendo la infección a distintos tiempos pi. La síntesis y nivel de los RNAs virales se determinó mediante RT-PCR y QC-RT-PCR, respectivamente. La síntesis de las proteínas N, G1 y totales fueron evaluadas mediante inmunofluorescencia con anticuerpos monoclonales y suero de pacientes infectados. Se analizó el efecto de la Actinonomicina -D, Cicloheximida, Puromicina, Ribavirina y Tunicamicina en infecciones con MOI de 0,1. A un MOI de 0,1, las proteínas N y G1 fueron detectadas a partir de las 24 y 48 horas pi, respectivamente. El RNA S se detectó a partir de las 18 y 48 horas pi nivel intracelular y extracelular, respectivamente. El RNA M se detectó a partir de las 48 horas pi simultáneamente en el intracelular y extracelular. A un MOI de 2,5 el RNA S se detectó a partir de las 4 horas pi (9,25x106 copias totales) en el intracelular, aumentando posteriormente hasta las 24 hrs pi (6,52x107 copias). Los RNA M y L se detectaron a partir de las 6 horas pi en las células (1,87x106 copias), aumentando hasta las 24 hrs pi (8,17x107 copias). A las 24 horas pi hubo sólo detección de los fragmentos M y L en el extracelular. La actinonomicina-D afectó la síntesis de los RNA virales. La cicloheximida y puromicina retrasaron la síntesis de los RNA y proteínas virales. La Ribavirina inhibió la síntesis de los RNA y proteínas virales. Estos resultados demuestran que el virus Andes tiene una cinética de síntesis de RNA y proteínas similares a otros Hantavirus . Sin embargo, nuestros resultados sugieren que el crecimiento in vitro de virus Andes sería más rápido del virus Sin Nombre. Los hallazgos muestran la utilidad de los antivirales para estudiar diferentes etapas del ciclo replicativo viral, y el eventual uso como estrategia terapéutica en pacientes infectados.
Abstract:
Hantaviruses are viruses belonging to the family Bunyaviridae that cause Hantavirus Cardiopulmonary Syndrome (HCPS). HCPS is produced by Sin Nombre Virus that has been identified since the syndrome was first reported in the United States in 1993, an hundred cases with a 30-40% mortality rate. In Chile, 370 cases of HCPS caused by Andes virus infection have been reported since 1996. There are not reports on the replication cycle of this vi rus until now. The goals of this thesis were to characterize the in vitro synthesis of RNAs and proteins of Andes virus, and to evaluate the effect of antiviral drugs in the replication cycle. Vero E6 cells were infected with Andes virus at a multiplicity of infection (MOI) of 0.1 and 2.5, and then incubated during different times post-infection (pi). The synthesis and level of the viral RNAs was detected by RT-PCR and QC-RT-PCR, respectively. The synthesis of N, G1, and totals viral proteins were detected by immunofluorescence assay with monoclonal antibodies and seropositive human sera. The effect of Actinomycin-D, Cicloheximide, Puromycin, Ribavirin and Tunicamycin was analyzed in infections with MOI of 0.1. N and G1 proteins were detected at 24 and 48 hours pi at an MOI 0.1, respectively. The S RNA was detected at 18 and 48 hrs pi in the cells and extracelullar, respectively. The M RNA was detected simultaneously at 48 hrs pi in the cells and extracelullar. The S RNA was detected at 4 hrs pi (9.25x106 copies) in the cells at an MOI 2.5, and then it increased until 24 hrs pi (6.52x107 copies). The M and L RNAs were detected at 6 hrs pi in the cells (1,87x106 copies), later these increased until 24 hrs pi (8,17x107 copies). M and L RNAs were only detected in extracellular fraction at 24 hrs pi. Actinomycin-D inhibited the synthesis of viral RNAs. Cicloheximide and puromycin delayed the synthesis of viral RNA and proteins. The Ribavirin inhibited the synthesis viral RNA and proteins. These results show that Andes virus has a similar kinetics of RNAs and proteins synthesis than other Hantavirus. However, our results suggest that replication cycle of Andes virus would be quicker than Sin Nombre virus. The findings show the useful of the antiviral drugs to study different stages of the replication cycle, and the eventual use as therapeutic strategy in infected patients.
Palabras Clave:
hantavirus; replicación viral; virus andes
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Barría Matus, Marcelo Alejandro
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcb275e/doc/fcb275e.pdf