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Título:
Análisis de posibles sitios de unión para apolipoproteina A-I en membranas de ribete en cepillo aisladas del intestino del pez Cyprinus carpio
Autor:
Báez Alvarez, Nadya Andrea
Profesor Patrocinante:
Amthauer Matthei, Rodolfo
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
carpa; apolipoproteinas; membrana celular
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2004
Resumen:
En varias especies de peces teleósteos la lipoproteína de alta densidad (HDL) y su principal apolipoproteína (apoA-I) constituyen la fracción proteica mayoritaria del plasma postulándose que jugaría un rol central en el metabolismo lipídico. Estudios realizados en la carpa (Cyprinus carpio) demuestran que, a diferencia de lo que ocurre en mamíferos, los lípidos de la dieta absorbidos en el intestino aparecerían mayoritariamente asociados a HDL y no a quilomicrones o VLDL. Sin embargo, aún cuando la apoA-I se ha inmunodetectado en el lumen intestinal y en enterocitos, su síntesis no ha podido ser demostrada en el intestino de la carpa. Teniendo presente su abundancia en el lumen intestinal, es probable que apoA-I se origine en el sistema hepato-biliar siendo luego secretada a la bilis durante la absorción de lípidos. Estudios preliminares sugieren que la apoA-I se asociaría a membranas de ribete en cepillo (BBM) y luego sería internalizada en forma intacta al enterocito donde contribuiría a movilizar los lípidos de la dieta. Para dilucidar el posible mecanismo de internalización de apoA-I se analizó la interacción de esta proteína con BBM aisladas. Se purificó tanto HDL como apoA-I desde el plasma de carpa y de trucha y la apoA-I de trucha se utilizó como un sistema heterólogo para facilitar la interpretación de los resultados de los ensayos de unión y “ligand blot” en presencia de apoA-I endógena, mediante la detección selectiva de apoA-I de trucha con un anticuerpo específico. A pesar de esta estrategia no se detectó ninguna proteína de BBM capaz de unir específicamente apoA-I de trucha. Resultados similares se obtuvieron utilizando apoA-I de carpa marcada con 125I en los ensayos de “ligand blot”, lo que sugiere que la interacción de apoA-I con BBM no involucraría una clásica unión proteína- receptor.
Abstract:
In several teleost species, high density lipoprotein (HDL) and its main apolipoprotein (apoA-I) constitute the main plasma protein fractions, suggesting that they would play a central role in the lipid metabolism. Studies performed in the carp fish (Cyprinus carpio) show that, unlike what happens in mammals, the dietary lipids absorbed by the intestine appear mainly associated to plasma HDL and not to chylomicrons or VLDL. However, even though apoA-I is immunodetected in the intestinal lumen and inside the enterocyte, its synthesis could not be demonstrated in the carp intestine. Considering the abundance of apoA-I in the intestinal lumen, it is probable that it is originated by the hepato-biliary system and then released to the bile during lipid absorption. Preliminary studies suggest that apoA-I would then associate to brush-border membranes (BBM) being internalized in intact form by enterocytes, where it would contribute to mobilize dietary lipids. In order to explain the possible mechanism of internalization of apoA-I, the interaction of this protein with isolated BBM was analyzed. Both, HDL and apoA-I were purified from carp and trout plasma and the trout apoA-I was used as a heterologous system that allows a better interpretation of the binding and ligand blotting experiments in the presence of endogenous apoA-I through immunodetection with a specific antibody against trout apoA-I. In spite of this approach we could not detect any BBM protein able to bind specifically to trout apoA-I. Similar results were obtained using 125I-labelled carp apoA-I in the ligand blotting assays suggesting that a classic ligand-receptor binding is not involved in the interaction of apoA-I with BBM.
Palabras Clave:
carpa; apolipoproteinas; membrana celular
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
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Idioma:
es
Copyright:
Báez Alvarez, Nadya Andrea
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fcb142a/html/index-frames.html