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Título:
Producción in vitro y caracterización de células dendríticas murinas
Autor:
Manzanares Lemarchand, Alejandra Lisette
Profesor Patrocinante:
Salazar Onfray, Flavio
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
células dendríticas; linfocitos T; in vitro; inmunología
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
2003
Resumen:
En los últimos cinco años se han desarrollado una serie de protocolos para generar células dendríticas en altas cantidades. Con el objeto de utilizarlas con fines terapéuticos, en nuestro país se ha comenzado a investigar en esta área de la inmunología, desarrollando protocolos experimentales para inmunoterapia contra el cáncer. Estos estudios requieren ser validados y profundizados en modelos experimentales, utilizándose para esto el modelo murino. En el presente trabajo, se procedió, como primer objetivo, a la generación de células dendríticas murinas derivadas de células progenitoras de médula ósea, utilizando para este fin un protocolo estandarizado por Lutz y col. (1999) el cual en este estudio ha sido modificado. Luego, para la caracterización fenotípica de las células dendríticas se utilizaron marcadores de superficie tales como; CD11c, CD86 y H2Kb los que se visualizaron mediante citometría de flujo. El objetivo final de este trabajo fue estandarizar un método de obtención de células dendríticas murinas con características fenotípicas estables, para posteriormente, fuera del contexto de esta memoria, utilizar estas células en la inmunización de ratones con péptidos antigénicos para el estudio de mecanismos de inmunología tumoral. Los resultados obtenidos a distintos días de cultivo (6, 8 y 10 días), muestran una alta presencia de la molécula integrina CD11c y de la molécula coestimuladora de linfocitos T (CD86), a los 10 días de cultivo, lo que estaría indicando un estado de madurez fenotípica de las células dendríticas analizadas. Además, se observó una alta expresión de la molécula de histocompatibilidad clase I (H2Kb), en las células dendríticas analizadas, lo que indica que potencialmente serían capaces de presentar antígenos e inducir una respuesta de linfocitos T específicos in vivo. Finalmente, se realizó una doble tinción celular para detectar la población que coexpresara CD11c y CD86. El resultado fue de un 55,27%, que correspondería a células dendríticas maduras. Estos estudios permitirán profundizar en la investigación de la inducción de respuestas mediadas por linfocitos T a través de la inmunización con células dendríticas establecidas in vitro.
Abstract:
In the last five years a series of protocols has been developed to generate dendritic cells in high quantities. In our country, research in this area of the immunology has been initiated with the intention of using them in therapeutic approaches, in particular in developing experimental protocols for immune therapy against cancer. These studies require to be validated and deeply studied using experimental models, particularly, the murine model. In the present work, the primary goal was to generate murine dendritic cells derived from stem cells of bone marrow, using for this issue an experimental protocol standardized by Lutz and col. (1999) and modified in this study. Then, for the phenotypic characterization of dendritic cells, surface markers such as; CD11c, CD86 and H2Kb were analyzed, through quantification by flow cytometry. The final goal of this work was to standardize a method for obtaining murine dendritic cells with stable phenotypic characteristics, with the intention of, outside the context of this thesis, use these cells in the immunization of mice with antigenic peptides for the study of biological mechanisms in tumor immunology. The results obtained at different days of cell culture (6, 8 and 10 days), showed a high presence of molecule integrin CD11c and the coestimulatory molecule of T lymphocytes (CD86), at day 10 of culture, which would indicate a state of phenotypic maturity of analyzed dendritic cells. In addition, it observed a high expression of major histocompatibility complexclass I molecules (H2Kb), in analyzed dendritic cells, indicating that those cells may be able to present antigen and induce a specific T lymphocytes response in vivo. Finally, a double cellular staining was performed to detect the population that coexpressed the molecules CD11c and CD86 and which we defined as dendritic cells. The result showed that 55.27% of produced cells should correspond to mature dendritic cells. These studies will allow the initiation of a project about T lymphocytes in vivo induction through the immunization with in vitro established dendritic cells.
Palabras Clave:
células dendríticas; moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad clase I; presentación antigénica
Palabras Clave:
dendritic cells; major histocompatibility complex class I molecules; antigen-presentation
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Manzanares Lemarchand, Alejandra Lisette
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2003/fvm296p/doc/fvm296p.pdf