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Título:
Localización inmunohistoquímica de las isoformas V2 y 2B del receptor V2 de vasopresina en riñón de rata
Autor:
Urra Ortiz, Carolina Andrea
Profesor Patrocinante:
González, Carlos B.
Grado a Optar:
Licenciado en Ciencias Biologícas
Materia:
receptores de vasopresina; riñon de rata
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Ciencias
Año de Aceptación:
2003
Resumen:
Vasopresina (AVP) es secretada desde el lóbulo posterior de la hipófisis y posee varias funciones biológicas, tales como inhibición de la diuresis, contracción del músculo liso vascular y estimulación de la glicogenólisis. Estos efectos son mediados por receptores específicos de membrana, acoplados a proteínas G, caracterizados por una organización de siete dominios de transmembrana. Se han descrito tres subtipos de receptores para AVP: V1a, V1b y V2. AVP es capaz de aumentar el numero de canales de agua en la superficie apical de células tubulares del riñón, a través del V2R, aumentando la reabsorción de agua en las células epiteliales principales del tubo colector renal. Mediante ensayos de RT-PCR de riñón de rata, se detectó, además del V2R (1,2 Kb), una isoforma de aproximadamente 1,1 Kb. Este producto fue secuenciado y corresponde a una nueva isoforma del receptor, a la cual designamos V2b, que se genera por empalme a un sitio aceptor alternativo 76 pb río abajo dentro del tercer exón con cambio en el marco de lectura. El producto de traducción de este cDNA genera una proteína 31 aminoácidos más corta que la isoforma V2 normal, con un extremo carboxiterminal completamente distinto. Se generaron anticuerpos específicos contra el péptido carboxiterminal. La especificidad de este anticuerpo se determinó mediante western blot y la localización de esta isoforma en riñón de rata, mediante inmunohistoquímica. La isoforma V2b de receptores de AVP se expresa en sitios específicos a lo largo del nefrón, localizándose en algunas asas gruesas de Henle y en todas las células principales y en IMCD. Además se encontró tanto en superficie apical como basal de células tubulares. La distribución de esta isoforma del V2R es muy especifica y su capacidad funcional en la fisiología tubular renal debe ser determinada.
Abstract:
Vasopressin (AVP), is secreted from the neural lobe of the hypophysis and has varied biological functions such as: inhibition of the diuresis, vascular smooth muscle contraction, and stimulation of glycogenolysis. These effects are mediated by specific membrane receptors, coupled to G proteins, characterized by an organization of seven transmembrane domains. Three vasopressin receptor subtypes have been described: V1a, V1b and V2. AVP is able to stimulate water channel number at the apical surface of the kidney tubular cells through a V2R, increasing the reabsorption of water in the principal cell of the renal collecting duct. Using RT-PCR assays from the kidney we detected in addition to V2R (1.2 kb) an isoform of approximately 1,1 Kb. This product, was sequenced, and corresponds to a new receptor isoform, which we have named V2b, is produced by an alternative splicing 76 pb downstream into exon 3, producing a reading frame shift. The translation product of this cDNA is a protein 31 aminoacids shorter than the V2 isoform and the carboxiterminal is completely different. We raised specific antibodies against the carboxiterminal peptide. The specificity of these antibodies were determined by western blot and the localization in rat kidney of this isoform was determined by imunohistochemistry. The V2b isoform of vasopressin receptors is expressed in specific sites along the nephron specifically localized in some of thick limb and all of principal and IMCD cell. This receptor was located at both the apical and basal surface of the tubular cells. Distribution of this isoform of V2R is very specific and its functional capacity in renal tubular physiology to be determined.
Palabras Clave:
receptores de vasopresina; riñon de rata
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Urra Ortiz, Carolina Andrea
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2003/fcu.81l/doc/fcu.81l.pdf