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Título:
Bradicinina 1-5 activa el receptor B1 de cininas e induce la fosforilación de mapk en células epidérmicas humanas en cultivo
Autor:
Matus Velásquez, Carola Elizabeth
Profesor Patrocinante:
Figueroa Valverde, Carlos
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
bradicinina; receptores de vasopresina
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2003
Resumen:
Los componentes del sistema calicreína-cinina participan en múltiples procesos fisiopatológicos. Sus componentes biológicos activos o cininas son inactivadas rápidamente por cininasas, produciendo una serie de péptidos activos e inactivos. Uno de estos péptidos de degradación, BK1-5 que hasta hace poco se pensaba era inactivo, se ha observado que es estable en el plasma humano durante 86 a 101 min. En esta tesis se investigó si BK1-5 es capaz de activar alguno de los receptores de cininas. Para este objeto se realizó un estudio comparativo de la acción de BK1-5 y agonistas de tipo B1 (LDBK) y B2 (LBK) sobre la fosforilación de una proteína clave en señalización celular como es MAPK (Erk1 y Erk2), utilizando queratinocitos humanos en cultivo. Se estimularon cultivos subconfluentes con diferentes concentraciones de BK1-5, LDBK y LBK por un tiempo fijo. En otros experimentos se usó tiempos variables de 0-120 min con BK1-5, LDBK y LBK 100 nM. Se observó que bastan dosis muy bajas de BK1-5 (0.1 nM) para fosforilar MAPK con la misma intensidad que lo hace LDBK, pero a dosis mas altas (100-1000 nM). Tanto BK1-5 como LDBK generaron un patrón de fosforilación transitorio en el tiempo, mientras que el agonista B2, LBK provocó una fosforilación prolongada de MAPK que se extendió por 120 min. Mediante inmunofluorescencia se pudo apreciar la translocación de MAPK fosforiladas al núcleo con cada uno de los tres péptidos usados. Antagonistas específicos para cada receptor, demostraron que la fosforilación de MAPK era bloqueada completamente al pretratar las células con un antagonista B1. Estos resultados indican que BK1-5 actuaría principalmente activando receptores de tipo B1, y sugieren además que este péptido sería un agonista que induce la fosforilación de MAPK con mayor eficiencia que los agonistas clásicos de este receptor.
Abstract:
Kallikrein-kinin system components play various important physiopathological roles. The kinins, the biologically active components of the system are rapidly inactivated by several kininases or kinin hydrolyzing enzymes to produce new active or inactive peptides. One of these fragments, BK1-5 thought for a long time to be inactive is the most stable kinin peptide in plasma with a half-life of 86 a 101 min. The aim of this study was to know whether BK1-5 is able to activate any of the well known kinin receptors. For this purpose, a comparative analysis on MAPK (Erk1 y Erk2) phosphorylation, one of the key signaling proteins, was carried out on human keratinocytes by using BK1-5 and kinin B1 (LDBK) and B2 (LBK) receptor agonists. Subconfluent keratinocyte cultures were stimulated with various concentrations of BK1-5, LDBK y LBK during a fixed period of time. In other set of experiments variable periods of time (0-120 min) were used during stimulation with each of the three peptides at 100 nM. These experiments showed that minute concentrations of BK1-5 (0.1 nM) can phosphorylate MAPK with an efficiency that was similar to that produced by LDBK, but at higher doses (100-1000 nM). Interestingly, both BK1-5 and LDBK produced a transient phosphorylation of MAPK whereas the kinin B2 agonist, LBK induced a prolonged effect that lasted for 120 min. Immunofluorescence revealed that phosphorylated MAPK are translocated to the nuclei of stimulated keratinocytes by all three peptides used in this study. Specific antagonists showed that MAPK phosphorylation after BK1-5 stimulation was completely blocked by pretreatment of cells with a kinin B1 antagonist. These results indicate that in human keratinocytes, BK1-5 mainly activates kinin B1 receptors being more efficient than the classic B1 agonists to induce MAPK phosphorylation.
Palabras Clave:
bradicinina; receptores de vasopresina
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/xml
Idioma:
es
Copyright:
Matus Velásquez, Carola Elizabeth
Dirección Electrónica:
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