Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Clonamiento y caracterización de una secuencia génica del pez Cyprinus carpio
Autor:
Hidalgo Figueroa, Andrea Alejandra
Profesor Patrocinante:
Figueroa Valverde, Jaime
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
carpa; clonación
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2003
Resumen:
Calicreína glandular (CG) es una serina-proteasa que al igual que otras proteínas de este tipo tiene una amplia distribución en diferentes tejidos, jugando un rol vital en variados procesos biológicos. CG está presente en todos los mamíferos, donde forma parte de una gran familia génica. Actualmente sólo se conocen las secuencias génicas de diversas CG de mamíferos, no existiendo ningún antecedente al respecto en organismos no mamíferos, como anfibios o peces. A partir del alineamiento de secuencias génicas de CG conocidas, se generó una sonda CG específica de 310pb, se rastrearon alrededor de 500.000 recombinantes de una genoteca de carpa y se obtuvieron 19 clones. El alto número de clones obtenidos sugiere que CG en carpa también forma parte de una gran familia génica. Estos clones presentaron diferentes intensidades de hibridación. Tres de ellos: λcGK423 (moderada), λcGK814 (fuerte) y λcGK1012 (moderada) fueron analizados por Southern blot. Se caracterizó y subclonó un fragmento genómico de 2200pb de λcGK423 (XbaI), en el vector plasmidial pBluescript SK+. El subclon pcGK4232200 se secuenció en su totalidad y analizó comparativamente con los bancos de datos. Este análisis reveló que pcGK4232200 tiene un inserto de 2259pb, que posee un 88% de identidad con el cDNA de α-tubulina de Oncorhynchus keta (salmón chum). Sin embargo, los clones restantes si podrían contener secuencias génicas de calicreína-like presentes en la carpa que permitiran estudiar el sistema calicreína en teleósteos. Análisis por Northern-blot usando como sonda pcGK4232200 con RNA total de diversos órganos de carpa, reveló una intensa expresión en riñón e hígado y más débil intensidad en agallas, músculo e hipófisis. La secuencia del gen putativo de α-tubulina permite estudiar que este gen se comporta como un gen constitutivo durante la aclimatización de carpa.
Abstract:
Glandular kallikrein (GK) is a serine-protease that as other proteins of this type has a wide tissue distribution, playing a vital role in varied biological processes. GK is present in the mammals where it forms part of a numerous gene family. CG specific gene sequences are only known from mammals, lacking evidence from no-mammalian organisms, such as amphibios or fishes. From the alignment of existing sequences, a probe of 310pb was generated. Screening of approximately 500.000 recombinants from a carp genomic library resulted in 19 positive clones. The high number of clones obtained suggests that GK in carp may also form part of a gene family. These clones presented different intensity of hibridation. Three clones, λcGK423 (medium), λcGK814 (strong), λcGK1012 (medium) were analyzed by Southern blot. λcGK423 was characterized and a fragment of 2200pb (XbaI) was subcloned in the plasmid vector pBluescript SK+. The subclone was fully sequenced and analyzed comparatively with the data bases. This sequence analysis revealed that the subclone pcGK4232200 contains an insert of 2259pb and presents 88% identity at the nucleotide level with cDNA of α-tubulin from Oncorhynchus keta (chum salmon). However, the other λ-clones could contain CG specific sequences which would allow further insight in the kallikrein system in carp. Northern-blot analyses using the 2200pb insert of the subclone pcGK4232200 with total RNA from diverse carp organs, revealed an intense expression in kidney and liver and weaker intensity in gills, muscle and pituitary. The sequence of the putative α-tubulin gene permits to study if this gene behaves as constitutive gene during the acclimatization of the carp.
Palabras Clave:
carpa; clonación
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Hidalgo Figueroa, Andrea Alejandra
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2003/fch632c/doc/fch632c.pdf