Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Expresión de una familia multigénica de calicreina glandular en carpa
Autor:
Vidal Gómez, René Luis
Profesor Patrocinante:
Figueroa V., Jaime
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
carpa; calicreina
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2002
Resumen:
La serina proteasa calicreína glandular (CG) pertenece a una super-familia génica que en humanos posee cerca de 15 genes. Al igual que otras proteínas de este tipo, tiene una amplia distribución de tejidos, jugando un rol vital en variados procesos. Hasta hoy sólo existen secuencias de CG de mamíferos, y ninguna información de no mamíferos, anfibios o peces. La hipótesis de trabajo postula que algunos de los genes miembros de la familia multigénica de calicreína glandular, está presente en el pez Cyprinus carpio. Se caracterizaron tres clones genómicos de carpa (λ GK222, λ GK433 y λ GK447), se analizaron por Southern blot y se subclonaron fragmentos de 4.000 pb (Eco RI), 4.400 pb (Eco RI) y 600 pb (Hind III) respectivamente, en el vector pBluescript. El subclon pcGK2223 (4.400 pb) fue sometido a secuenciación. El análisis comparativo de 2.475 pb de dicho inserto, reveló a presencia de tres regiones con alto grado de identidad con regiones de cDNA de serina proteasas de diversos organismos, al igual que la secuencia aminoacídica derivada de este fragmento. Además las regiones que presentaron identidad con serina proteasas a nivel nucleotídico y aminoacídico coinciden, lo que da indicios a que podrían corresponder a exones. Análisis de Southern blot de DNA genómico usando como sonda el inserto de 4.400 pb, reveló una diversidad de fragmentos, lo que implicaría que, en carpa CG posee un alto número de genes. Análisis de Northern blot de RNA total de diversos órganos de carpa, usando como sonda pcGK2223 (4.400 pb), reveló una fuerte expresión en agalla, riñón y una reacción más débil en músculo, hígado e hipófisis. Esta expresión en diversos órganos, junto con el alto número de fragmentos observado en Southern-blot genómico, indica que CG de carpa formaría parte de una gran familia génica, tal vez con más genes que en mamíferos considerando la tetraploidía de este organismo.
Abstract:
The serin protease glandular kallikrein (CG) belongs to a super-family of genes that in human is composed of at least 15 genes. Similar to other proteins of that type, CG occurs widely distributed in different tissues, playing an essential role in various processes. Until recently genomic secuences of CG were only described in mammals lacking completely information from non-mammalian species, amphibian or fish. The working hypothesis postulates that some of the gene members of the multigene familiy of glandular calicrein are present in the fish Cyprinus carpio. Three genomic clones from carp (λ GK222, λ GK433, λ GK447) were characterized, analysed by Southern blott and fragments of 4.400 bp (Eco RI), 4.000 bp (Eco RI) and 600 bp (Hind III) were subcloned in pBluescript vector. From the subclone pGK2223 (4.400 bp) some 2.475 bp were sequenced. As shown by comparative sequence analyses three regions reveal high level of identity with regions of cDNA of serin proteases from different organisms as well as the derived amino acid sequences. In addition, the regions showing identities with serin proteases on the nucleotide and amino acid level suggest that they might correspond to exons. Applying the 4.4kb fragment of pcGK2223 as probe Southern blott analyses of carp genomic DNA revealed several distinct bands suggesting that in carp there may exist a high number of genes. The same probe employed in Northern blott analyses of various carp tissues, resulted in strong signals in kidney and gills, less reaction in muscle, liver and hypophysis. The expression in different organs, together with the observation of a high number of fragments in genomic Southern Blott analyses, might indicate that CG in carp belongs to a family of genes with more gene members than in mammals which might be related to the tetraploidy of this fish.
Palabras Clave:
carpa; calicreina
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Vidal Gómez, René Luis
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2002/fcv649e/doc/fcv649e.pdf