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Título:
Células HL-60 como modelo para el estudio del rol de PPARs (receptores activados por proliferadores peroxisomales) en diferenciación de células promielocíticas
Autor:
Martínez Jahnke, Susan Fabiola
Profesor Patrocinante:
Bronfman, Miguel
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
células HL-60; receptores activados por proliferadores peroxisomales
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2002
Resumen:
Las células promielocíticas humanas HL-60 han sido ampliamente utilizadas en el estudio de las vías de transducción de señales involucradas en diferenciación celular. Estas células, pueden diferenciarse tanto a macrófagos como a granulocitos. Entre las vías involucradas en la diferenciación de monocitos a macrófagos humanos, la más recientemente descubierta es la de los PPARs (peroxisome proliferator activated receptors). Entre las vías controladas por PPARs, destaca la homeostasis del colesterol en macrófagos, mediando la expresión de receptores como el receptor de lipoproteínas oxidadas (CD36) y transportadores como ABCA1, que media el transporte de colesterol. El objetivo de esta tesis fue validar las células HL-60 como modelo para el estudio de la función de estos receptores en la diferenciación de células promielocíticas. Dado que para los PPARs, tanto los ácidos grasos esenciales como diversos eicosanoides han sido propuestos como ligandos fisiológicos, estudiamos además el efecto que tiene la adición de ácido araquidónico (AA), eicosapentaenoico (EPA) y docosahexaenoico (DHA) al medio de cultivo en la diferenciación de HL-60, y en la expresión de genes blanco de macrófagos. Los resultados sugieren que las células HL-60 expresan las tres isoformas de PPAR (α, β/δ y). La expresión de PPARγ y PPARδ aumenta en el proceso de diferenciación a macrófagos, no encontrándose mayor efecto por la adición de ácidos grasos esenciales. Los genes blanco como CD36 y ABCA1 están en mayores niveles en la diferenciación a macrófagos, sin embargo su expresión tampoco se ve influenciada mayormente por los ácidos grasos. En contraste, al diferenciar las células a granulocitos, aumenta la expresión de PPARα y PPARδ, sin cambios aparentes en PPARγ.
Abstract:
Human HL-60 promyelocitic cells have been extensively used in the study of signal transduction pathways involved in cell differentiation. HL-60 cells can differentiate both to macrophage-like or granulocyte-like cells. Among the signaling pathways participating in the differentiation of human monocytes to macrophages, the most recently involves the PPARs (peroxisome proliferators activated receptors). PPARs control cholesterol homeostasis in macrophages, where these nuclear receptors determine the expression of proteins such as the oxidized lipoprotein receptor (CD36) and the ABCA1 transporters, which mediate the transport of cholesterol. The main objective of this Thesis was the validation of HL-60 cells as a model for studying the role of these receptors en the differentiation of myeloid cells. Since essential fatty acids and various eicosanoids have been proposed to act as physiological ligands of PPARs, we additionally studied the effect of arachidonic (AA), eicosapentaenoic (EPA), and docosahexaenoic (DHA) acids on the differentiation of HL-60 cells and in the expression of macrophage target genes. We found that HL-60 cells express all three isoforms of PPARs (α, β/δ, and γ). The expression of PPARγ and β/δ is increased during the differentiation to macrophages. No effect of essential fatty acids was observed on PPAR expression. Target genes such as CD36 and ABCA1 are present in higher levels in HL-60 cells differentiated to macrophages, however their expression is not affected by essential fatty acid addition. In contrast, when HL-60 cells are differentiated to granulocytes, the expression of PPARα and β/δ is increased, without any apparent changes in PPARγ expression.
Palabras Clave:
células HL-60; receptores activados por proliferadores peroxisomales
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Martínez Jahnke, Susan Fabiola
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2002/fcm385c/doc/fcm385c.pdf