Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Transporte de nicotinamida en eritrocitos humanos. Nicotinamida no es sustrato del transportador facilitativo de hexosas glut1
Autor:
Bustamante Vilches, Fernando Patricio
Profesor Patrocinante:
Reyes, Alejandro
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
niacinamida; proteinas transportadoras
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2002
Resumen:
Se ha propuesto que GLUT1, una proteína de membrana que permite el transporte facilitado de hexosas y de la forma oxidada de la vitamina C, el ácido deshidroascórbico, es también capaz de transportar nicotinamida (Sofue et al. Posible multifunction of glucose transporter: Transport of nicotinamide by reconstituted liposomes. Biochem. J. 288, 669-674, 1992). Para probar esta proposición, en esta Tesis estudiamos el transporte de 2-desoxi-Dglucosa, 3-O-metil-D-glucosa y de nicotinamida en eritrocitos humanos enteros y en vesículas de membranas de eritrocitos preparadas con una orientación normal (lado citoplasmático hacia adentro) o invertida (lado citoplasmático hacia fuera). En eritrocitos y en vesículas, el transporte de nicotinamida fue saturable con un valor de KM de 5,5 mM en eritrocitos y de 6,1 mM y 6,0 mM respectivamente, para el influjo y eflujo de sustrato en vesículas. Encontramos que el transporte de hexosas por GLUT1 no fue competido por nicotinamida tanto en eritrocitos enteros como en vesículas normales o invertidas. Asimismo, el transporte de nicotinamida no fue afectado por hexosas o por inhibidores del transporte de glucosa como citocalasina B, floretina, genisteína o miricetina. Por otra parte, nicotinamida es capaz de desplazar la unión específica de citocalasina B a GLUT1 en membranas de eritrocitos, lo que sugiere que la vitamina se une realmente a la proteína GLUT1. Sin embargo, lo hace de una manera no competitiva, lo cual indica que los sitios de unión de nicotinamida y de los sustratos de GLUT1 son diferentes e independientes. Los resultados entonces sugieren que GLUT1 no permite el transporte facilitado de nicotinamida y proponemos en vez la existencia de otros sistemas como responsables de facilitar el transporte de nicotinamida a través de las membranas celulares.
Abstract:
It has been proposed that GLUT1, a membrane protein that transports hexoses and the oxidized form of vitamin C, dehydroascorbic acid, is also able to transport nicotinamide (Sofue et al. Possible multifunction of glucose transporter: transport of nicotinamide by reconstituted liposomes. Biochem. J. 288: 669-674, 1992). To ascertain this, in this Thesis we studied the transport of 2-deoxy-D-glucose, 3-O-methyl-D-glucose and nicotinamide in human erythrocytes and in erythrocyte membrane vesicles prepared in a normal (right-side-out vesicles) or inverted (inside-out vesicles) orientations. In erythrocytes and vesicles the transport of nicotinamide was saturable, with KM values of 5,5 mM in erythrocytes and of 6.1 and 6.2 mM respectively for influx and efflux in vesicles. We found that the transport of the hexoses was not competed by nicotinamide in both the erythrocytes and the erythrocyte normal or inverted vesicles. Likewise, the transport of nicotinamide was not affected by hexoses or by inhibitors of glucose transport such as cytochalasin B, phloretin, genistein and myricetin. On the other hand, nicotinamide blocked the binding of cytochalasin B to human erythrocyte membranes, suggesting that the vitamin does bind to the GLUT1 protein. However, it did so in a non-competitive manner, which indicates that the nicotinamide and substrates binding sites on GLUT1 are different and independent. Therefore, our results indicates that GLUT1 does not transport nicotinamide, and we propose instead the existence of other systems for the translocation of nicotinamide across cell membranes.
Palabras Clave:
niacinamida; proteinas transportadoras
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Bustamante Vilches, Fernando Patricio
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2002/fcb982t/doc/fcb982t.pdf