Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Expresión y localización subcelular de la Isoforma V2b de receptores de vasopresina
Autor:
Anazco Oyarzún, Carolina del Carmen
Profesor Patrocinante:
González, Carlos
Grado a Optar:
Bioquímico - Licenciado en Bioquímica
Materia:
receptores de vasopresinas
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias
Escuela:
Escuela de Bioquímica
Año de Aceptación:
2002
Resumen:
La hormona vasopresina (VP) es un nonapéptido cíclico que posee varias funciones biológicas como por ejemplo, inhibición de la diuresis, estimulación de la glicogenólisis hepática y contracción de la musculatura lisa vascular. Estos efectos son ejercidos a través de la activación de receptores que actúan acoplados a proteínas G. Tres subtipos de receptores de vasopresina han sido distinguidos sobre la base de características funcionales y farmacológicas: V1a, V1b y V2. Por experimentos de RT-PCR en riñón de rata, se detectó un producto de amplificación de aproximadamente 1100 pb. La secuenciación demostró que éste cDNA corresponde a una nueva isoforma de receptores de vasopresina a la cual denominamos V2b. Esta nueva isoforma posee una delección de 76 pb en su secuencia nucleotídica, lo que genera un cambio en el marco de lectura y un extremo carboxilo terminal completamente distinto. El objetivo de la presente tesis fue estudiar la localización subcelular de esta nueva isoforma en células epiteliales polarizadas y determinar su capacidad funcional. Para ello, el cDNA de la isoforma V2b fue subclonada en el plasmidio pEGFPN1 y posteriormente transfectada establemente en células MDCK. Estudios de microscopía confocal y el uso del marcador de membrana plasmática Di-8 ANEPPS, permitieron localizar a la proteína de fusión V2b-GFP en la membrana plasmática, encontrándose tanto en el dominio apical como basolateral. Sin embargo, la expresión pasajera del receptor V2b en células CHO mostró que esta isoforma es procesada más lentamente a la superficie celular que el receptor V1a. Estos resultados apoyan la idea que esta isoforma cumple un rol biológico importante en la fisiología tubular renal.
Abstract:
Vasopressin hormone (VP) is a cyclic nonapeptide with plenty biological functions like, diuresis inhibition, stimulation of hepatic glycogenolysis and vascular smooth muscle contraction. These effects are exerted through the activation of vasopressin receptors coupled to G proteins. Three vasopressin receptor subtypes have been classified under the basis of their functional and pharmacological characteristic: V1a, V1b and V2. RT-PCR assays of total RNA from rat kidney samples showed an approximately 1100 bp amplification product. Sequencing of the cDNA showed that this receptor corresponds to a new vasopressin receptor isoform which we have named V2b. This new isoform bears a 76 bp deletion on its nucleotide sequence producing a reading frame shift and therefore, a totally different C-terminal tail. The aim of this work was to study the subcellular localization of this isoform in polarized epithelial cells and to determine the functional and pharmacological properties. For this purpose, cDNA V2b was subcloned on the pEGFPN1 plasmid and subsequently stably transfected in MDCK cells. Studies with confocal microscopy and the use of the plasma membrane marker Di – 8 ANEPPS, allowed us to localize the V2b-GFP fusion receptor in both apical and basolateral domains in MDCK cells. However, the transient expression of the V2b isoform showed that this receptor is processed to the surface of the cell slower than the V1a receptor isoform. These results support the idea that this isoform has an important biological role in renal tubular physiology.
Palabras Clave:
receptores de vasopresinas
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Anazco Oyarzún, Carolina del Carmen
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2002/fca637e/doc/fca637e.pdf