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Título:
Diagnóstico de brucelosis bovina mediante técnicas de unión primaria en leche y suero y comparación con las técnicas tradicionales
Autor:
Pino Olguín, Carolina Alejandra
Profesor Patrocinante:
Rojas Soto, Ximena
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
brucelosis; técnicas y procedimientos diagnósticos - veterinaria
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
2000
Resumen:
Diagnóstico de Brucelosis bovina mediante técnicas de unión primaria en leche y suero y comparación con las técnicas tradicionales. En Chile, como en muchos países de Latinoamérica, la brucelosis bovina es una enfermedad enzoótica que provoca grandes pérdidas a la ganadería y además genera problemas de salud pública por tratarse de una enfermedad zoonótica. Los pilares fundamentales del control requieren de un diagnóstico oficial. Hasta la fecha en leche se tiene como método diagnóstico rutinario la prueba del anillo (RT) la cual presenta el inconveniente de dar resultados falsos positivos cuando la muestra incluye leche calostral o mastítica, además se comienza a usar I-ELISA que presenta la ventaja de superar las limitaciones del RT. Sin embargo en suero sanguíneo, las pruebas de rutina han avanzado un poco más usándose con rutina la prueba de Rosa de Bengala (RB), fijación de complemento (FC) como prueba confirmatoria y C-ELISA la cual da una mayor exactitud. Así, el objetivo de este trabajo fue validar una técnica de unión primaria para la detección de anticuerpos anti-brucella abortus en leche y suero, esta técnica fue la de Fluorescencia Polarizada (FP). Las muestras de suero se clasificaron en tres estratos: Predios libres de brucelosis con certificación del SAG (2051), Predios libres de brucelosis sin certificación del SAG (2153) y Predios sin información (2067). Las muestras de leche pertenecían a los mismos predios de donde se obtuvo el suero sanguíneo correspondiendo a muestras de estanque, el número de muestras por estrato fue de: Predios libres de brucelosis con certificación de SAG (8), predios libres de brucelosis sin certificación del SAG (7) y predios sin información (8). El I-ELISA usado en leche se realizó con lipopolisacárido de Brucella como antígeno (LPS); anticuerpo monoclonal para Igd de bovino conjugado con peroxidasa de rábano picante (M23), como sustrato agua oxigenada y cromógeno ABTS. El C-ELISA usado en las muestras de suero se realizó con el mismo LPS que para leche se utilizó un anticuerpo IgG anti-ratón de cabra conjugado con peroxidasa de rábano picante. Para la fluorescencia polarizada se utilizó cadena O conjugada con fluoresceína. Los resultados señalan que el umbral de positividad para FP en suero sanguíneo se ubicó en 92 mP. La sensibilidad y especificidad de FP fue igual a un 100%. Como conclusión se puede decir que FP es una buena alternativa para tener en cuenta para el diagnóstico de brucelosis bovina tanto en leche como en suero, debido a su buena sensibilidad y especificidad diagnóstica.
Abstract:
Diagnosis of bovina brucellosis by primary binding serological assays in milk and serum and comparison with traditional techniques. In Chile, like in many Latin-American countries, bovine brucellosis is an enzootic disease that generales great economic losses in the cattle industry as well as public health concerns due to it's zoonotic character. The basis for the control of the disease is the availability of an official diagnostic method. Until now, the routine diagnostic method for testing milk samples is the ring test (RT). This method has the disadvantage of yielding false positive results when calostral or mastitic milk is tested. I-ELISA is currently beginning to be used with the main advantage of bypassing the limitations of the RT. However, routine tests for blood serum have advanced faster and currently the Bengal Rose and Complement Fixation tests are being used, and c-ELISA is used as a confirmatory test providing greater accuracy. The objective of this work was to valídate a primary binding assay, the Polarized Fluorescence test (FP), for the detection of anti-brucella abortus antibodies in milk and serum samples. Serum samples were divided into three categories: Brucellosis free farm with certification by the Agriculture and Animal Service (SAG) (2051), Brucellosis Free farms without SAG certification (2153) and Farms with no available records (2067). Bulk tank milk samples were also obtained from these farms. The number of samples per category were: Brucellosis Free farms with SAG certification (8), Brucellosis free farms without SAG certification (7) and farms with no records (8). The l-Elisa used in milk samples was perfomned using Brucella LPS as the antigen; (M23), a monoclonal anti-lgG antibody conjugated to horseradish perbxidase (HRPO), and hydrogen peroxide/ABTS substrate. C-Elisa was performed using the same antigen as in milk l-Elisa and anti-mouse IgG antibody conjugated to HRPO. For the FP technique, O-chain conjugated to fluorescein was used. The results indícate that the positivity threshold for FP in serum samples was located at 92 mP. The sensitivity and specificity of this test was 100%. The conclusión of the present work is that FP is a good alternative that should be considered for the diagnosis of bovine brucellosis in milk as well as in serum samples due to it's high diagnostic sensitivity and specificity.
Palabras Clave:
brucelosis; técnicas y procedimientos diagnósticos - veterinaria
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Pino Olguín, Carolina Alejandra
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2000/fvp657d/doc/fvp657d.pdf