Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Fecundación de Ovocitos bovinos por inyección de un espermatozoide en el Citoplasma
Autor:
Villanueva Morales, Irma Sandra Paola
Profesor Patrocinante:
Gatica, Renato
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
fecundación; espermatocito
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
1997
Resumen:
La fecundación de ovocitos a través de la inyección de un espermatozoide ha sido de amplio estudio en el ultimo tiempo (Goto y col.,1990a). Esta técnica tiene enormes ventajas en solucionar problemas de fertilidad y además de multiplicar el potencial de los espermatozoides sexados por utilizar un reducido número en la fecundación. En este trabajo se estableció un método que permite obtener embriones a través de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (IICE). Los ovocitos fueron obtenidos de ovarios procedentes de hembras faenadas en el matadero local y se seleccionaron considerando aptos aquellos que presentaron cumulus compacto, con 8 o mas capas de células y su citoplasma homogéneo. El número de ovocitos con estas características fue de 448, los que fueron puestos a madurar en TCM-199 con 10% de suero fetal bovino (SFB) a 38,5°C con 5% de CO2 y alta de humedad, por un lapso de 24 hrs, apreciándose la expansión del cumulus en todos los ovocitos. Transcurrido este tiempo se retiraron de la incubadora y se desnudaron usando un agitador, obteniendo 290 (64,7%) ovocitos. Posteriormente se comprobó que 254 (87,6%) de estos se encontraban en metafase II, mediante la visualización del segundo cuerpo polar. Estos ovocitos se pusieron en gotas que contenían medio Bracket y Oliphant (BO) con seroalbúmina bovina (BSA) y en estas condiciones se les inyecto un espermatozoide en el citoplasma mediante una pipeta de inyección, a través de un micromanipulador. Posteriormente los ovocitos inyectados se dividieron en dos grupos de 127 ovocitos cada uno: el primero se puso a incubar a una temperatura de 38.5°C, y el segundo grupo se sometió a un período de preincubación a 23-25°C y posteriormente se incubo en similares condiciones del primer grupo, conservando igual atmósfera de CO2 y humedad como las descritas. Luego de 48 hrs. de cultivo, se observe los ovocitos inyectados, apreciándose si estaban divididos o no. Todos se tiñeron con Aceto - Orceína, para corroborar la formación de pronúcleos. Con este procedimiento se observo formación de pronúcleos en un 3,9% y en un 19,7% en los ovocitos sin y con preincubación respectivamente, siendo estas diferencias significativas (p<0,01). Se observo división en un 3,1% y 13,4% en los ovocitos sin y con preincubación respectivamente. Las diferencias son significativas (p<0.05). Se puede concluir que el desarrollo de los ovocitos inyectados es mayor con un período de preincubación a temperaturas menores que las de cultivo.
Abstract:
Oocyte fertilization by spermatozoid injection has been recently subjet of wide study (Goto y col.,1990a). This technique has enormous advantages in solving fertility problems, and also for multiplying the potential of sexed spermatozoids by using a small quantity in fertilization. In this study, it was stablished a method that allows to obtain embryos by spermatozoid intracitoplasmatic injection (IICE). Oocytes were obtained from ovaries of females slaughtered at the local abattoir, and selected considering as suitable those presenting compact cumulus, with 8 or more cell layers, and homogeneous cytoplasm. The ovocite quantity showing these characteristics was 448, which were allowed to mature in TCM-199 with 10% bovine fetal serum (SFB) at 38,5°C with 5% CO2 and high humidity, for a 24 hours period, observing a cumulus expansion in all ovocites. After this period, they were removed from the incubator and denuded by a stirrer, obtaining 290 (64,7%) ovocites. Subsequently it was confirmed that 254 (87,6%) of them were in metaphase II, by visualization of the second polar body. These oocytes were placed inside drops containing Brackett and Oliphant (BO) medium with bovine seroalbumin (BSA), and in this conditions were injected with a spermatozoid in the cytoplasm by an injection pipette, through a micromanipulator. Subsequently the injected oocytes were divided into two groups of 127 ovocites each: the first one was placed in incubation at 38,5°C, and the second group was subjected to a preincubation period at 23-25°C, and subsequently was placed in incubation in similar conditions as the first group, maintaining equal CO2 atmosphere and humidity as those described. After 48 hours in culture, the injected oocytes were observed to see if they were divided. All were dyed with Aceto- Orceina, to verify pronuclea formation. With this procedure the pronucleous formation was observed in a 3,9%, of oocytes without preincubation and in a 19,7% of oocytes with preincubation, these differences were significant (p<0,01). The division of oocytes was observed in a 3,1% of ovocites without preincubation, and in a 13,4% of oocytes with preincubation. The differences were significant (p<0,05). It is possible to conclude that the development of injected oocytes is higher, with a preincubation period at lower temperatures than those of culture.
Palabras Clave:
fecundación; ovocito; espermatozoide; inyección; fertilidad
Palabras Clave:
fertilization; oocyte; spermatozoid; microinjection; fertility
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Villanueva Morales, Irma Sandra Paola
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/1997/fvv718f/doc/fvv718f.pdf