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Título:
Comparación de dos técnicas de diagnósticos de Salmonella spp. en harina de pescado
Autor:
Schlicht Stange, Alberto Alejandro
Profesor Patrocinante:
Gesche Robert, Erika
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
técnicas y procedimientos de diagnósticos veterinarios; harina de pescado
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
1997
Resumen:
Como aporte al conocimiento de técnicas de aislamiento de Salmonella spp. en harina de pescado, se compararon los resultados de los análisis realizados a muestras de harina de pescado previamente diagnosticadas positivas a Salmonella spp. Se realizaron 20 análisis de muestras distintas y 10 repeticiones de una sola muestra según la técnica tradicional estandarizada por SERNAP (norma ISO 6579/90) y la técnica de separación inmunomagnética (IMS). Se determinó la presencia/ausencia de Salmonella spp. según la metodología convencional pesando 25 g de muestra añadiéndose a 225 ml de caldo de enriquecimiento no selectivo, incubándose a 37°C por 20 h. El enriquecimiento selectivo prosigue sembrando 1 ml de este caldo en el caldo Selenito Cistina, incubando a 37°C por 24 h y 0,1 ml en el medio de Rappaport-Vassiliadis, incubando a 42°C por 24 h. Se aísla la bacteria sembrando en placa en los agares selectivos Rambach y XLD, incubándolos a 37°C durante 24 h y las colonias sospechosas se someten a confirmación bioquímica. La técnica de IMS se basa en un tipo diferente de enriquecimiento selectivo requiriendo también de una etapa previa de enriquecimiento no selectivo, incubándose durante 5 y 20 h a 37°C. A partir del caldo incubado se obtienen 2 ml y se añaden 100 µl de la suspensión de perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos anti-Salmonella spp., se agitan a temperatura ambiente durante 1 h. El aislamiento presuntivo y la confirmación bioquímica se realizan siguiendo los mismos procedimientos de la técnica tradicional. La técnica de IMS se basa en un tipo diferente de enriquecimiento selectivo requiriendo también de una etapa previa de enriquecimiento no selectivo, incubándose durante 5 y 20 h a 37°C. A partir del caldo incubado se obtienen 2 ml y se añaden 100 µl de la suspensión de perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos anti-Salmonella spp., se agitan a temperatura ambiente durante 1 h. El aislamiento presuntivo y la confirmación bioquímica se realizan siguiendo los mismos procedimientos de la técnica tradicional. En los 20 análisis de muestras diferentes los resultados evidenciaron la presencia de Salmonella spp. en 5 muestras del total analizadas por la técnica tradicional (5/20), en cambio usando la IMS se aisló Salmonella spp. en 3 muestras del total (3/20). En la prueba de repetibilidad, la técnica convencional determinó positivas 6 muestras del total (6/10), mientras que la IMS aisló Salmonella spp. en 8 oportunidades (8/10) del total de ensayos. Ambas técnicas obtuvieron resultados similares de diagnóstico y una repetibilidad equivalente, siendo la IMS una alternativa confiable en los análisis rutinarios de Salmonella spp.
Abstract:
As a trend to perfection the isolation methods of Salmonella spp. in fish meal, the results of the analysis made in fish meal samples previously diagnosed positive to Salmonella spp. were compared. 20 analysis in different samples were made and 10 repetitions of one single sample according to traditional technique standardized by Sernap (norm ISO 6579/90) and the immunomagnetic separation technique (IMS). The presence/absence of Salmonella spp. was determined according to the conventional methodology weighing 25 g of sample adding it to 225 ml of non selective enrichment broth, incubating it at 37°C for 20 h. The selective enrichment process continues by transfering 1 ml of this broth in to Selenite Cistine broth. It is incubated at 37°C for 24 h. Also 0,1 ml of the non selective broth is transfered to Rappaport-Vassiliadis broth. It is incubated at 42°C for 24 h. Salmonella spp. is isolated by plating on selective agars Rambach and XLD, incubated at 37°C for 24 h and the suspect colonies submited to biochemical confirmation. The IMS is a different selective enrichment wich also requires a previously non selective enrichment. Incubating it at 37°C for 5 h and 20 h. From this broth 2 ml are obtained and 100 µl of the suspention immunomagnetic beads coated by anti-Salmonella antibodies are added. They are gently vortexed at room temperature for 1 h. The presuntive isolation and the biochemical confirmation are the same as for the traditional technique. In the 20 analysis of different samples the results showed the presence of Salmonella spp. in 5 samples of the total analyzed by traditional technique (5/20), while using IMS, 3 samples of the total were isolated (3/20). In the repeatability test, the traditional method determined that 6 samples of the total were positive (6/10), while the IMS isolated Salmonella spp. in 8 opportunities (8/10) of the total trials. Both methods showed similar results of diagnosis and an equivalent repeatability, being the IMS a trustful alternative in the habitual analysis of Salmonella spp.
Palabras Clave:
harina de pescado; Salmonella; técnicas de diagnóstico; separación inmunomagnética
Palabras Clave:
fish meal; Salmonella; diagnostic technique; immunomagnetic separation
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Schlicht Stange, Alberto Alejandro
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/1997/fvs344c/doc/fvs344c.pdf