Información detallada Tesis (Metadatos y Resúmenes)

Título:
Desarrollo de embriones bovinos obtenidos de ovocitos madurados in vitro bajo diferentes condiciones de cultivo
Autor:
Lorenzini Gajardo, Emilio José
Profesor Patrocinante:
Gatica García, Renato
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
desarrollo de embriones; cultivo in vitro
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
1997
Resumen:
La maduración in vitro permite obtener ovocitos aptos para la fecundación in vitro, para lo cual se ha probado distintos sistemas. Debido a esto se llevó a cabo dos experimentos con el propósito de determinar en forma indirecta, a través del desarrollo embrionario, si las células del cumulus ooforus son necesarias para la maduración del ovocito, y de ser necesarias, cual es la cantidad requerida. Los ovocitos se sometieron a maduración en medio TCM-199 (suplementado con FCS) e incubados por 24 horas a 39°C, con 5% de CO2 y alta humedad. Para la fecundación se utilizó medio de fecundación (Medio tiroideo-lactato modificado y suplementado con BSA) e incubados en las mismas condiciones. El cultivo de embriones se realizó en medio CRl-aa, en cámara de incubación hasta el día 7. Se obtuvo ovocitos aspirando folículos de vacas faenadas en el matadero local para utilizarlos en ambos experimentos. En el experimento N° 1, fueron separados 627 ovocitos en ocho grupos. Los grupos 1 y 2 fueron madurados con su complejo cumulus ooforus intacto. Los otros seis grupos (3 a 8), madurados sin cumulus (desnudos). De estos seis grupos, cuatro fueron madurados en una monocapa de células del cumulus (co-cultivo). Dos grupos en una monocapa fresca y dos en monocapa cultivada. Los dos grupos restantes fueron madurados desnudos y sin monocapa. Por cada uno de los cuatro tratamientos se preparó un grupo de 10 ovocitos por gota de medio, y otro grupo de un ovocito por gota. El grupo 1 (control), desarrolló un 41.3 % (43/104) de mórulas y 29.8% (31/104) de blastocisto, los otros 7 grupos se desarrollaron significativamente a tasas menores (p<0.05). Pese a que no hubo significancia estadística de los resultados de los siete grupos entre sí, se observó un mayor desarrollo en ovocitos madurados y fecundados en monocapa cultivada que en la monocapa fresca. Los ovocitos cultivados desnudos y sin monocapa presentaron el más bajo desarrollo de todos los grupos. Los ovocitos cultivados en grupo de 10 por gota presentaron un desarrollo significativamente más alto que los cultivados individualmente (p<0.05). En el experimento N° 2, se establecieron dos grupos, uno de ovocitos con complejo cumulus completo y otro de ovocitos con el cumulus parcialmente removido. De 326 ovocitos madurados, se contaron 235 (72.1%) en la primera división, 160 (49.1%) llegaron a mórula y 79 (24.2%) alcanzaron la etapa de blastocisto. Mientras que los semidesnudos, de un total de 411, se desarrollaron 354 (86%) a la primera división, 72 (17.5%) hasta mórula y 16 (3.8%) blastocistos. Nuevamente, el porcentaje de desarrollo más alto lo obtuvo el grupo de ovocitos con el cumulus completo, siendo en cada caso estadísticamente significativo (p<0.05). Se puede concluir que el cumulus ooforus tiene un efecto favorable sobre la maduración y/o fecundación in vitro, debe envolver al ovocito en un área mayor al 50% y el uso de co-cultivo no reemplaza su efecto sobre el ovocito. Además, hay mayores tasas de desarrollo cuando son madurados en grupo que individuales.
Abstract:
In vitro maturation allows to obtain liable oocytes for in vitro fertilization, for which several systems have been tested. Due to this, two experiment were carried out in order to determine, indirectly through embryonic development, weather cumulus cells are needed for oocyte maturation, and the amount of these cells required to accomplish oocyte maturation and further embryonic development. The oocytes were maturated in TMC-199 medium (supplemented with FCS) and incubated for 24 hours at 39°C, with 5% CO2 and high humidity. For in vitro fertilization modified Tyrode-Lactate medium plus BSA was used and then oocytes were incubated at the same conditions above. Embryo culture was done in CRl-aa medium in incubator until day 7. Ovaries were obtained from a slaughterhouse about an hour away from the laboratory, follicles were aspirated and the oocytes recovered were used in both experiments. The experiment N° 1 consisted of 627 oocytes divided in 8 different groups. Groups 1 and 2 were cultured with their intact cumulus complex . The other six groups (3 to 8), were matured without cumulus cells (naked). From these six groups, four of them were kept with a cumulus cells monolayer (co-culture). Two groups with a fresh monolayer and other two with aged monolayer. The last two groups were matured naked and without monolayer. These four different treatments were assigned to groups often oocytes and individual oocytes as well. The 1 group N° 1 (control) developed the highest rate at 41.3% (43/104) of morulas and blastocyst 29.8% (31/104). All other groups developed lower rates, showing statistically significant differences from the control group (p<0.05). Although there was no statistically significant differences between the other 7 groups, co-cultured oocytes with aged and well established cumulus monolayer, developed better than those oocytes co-cultured with fresh cumulus cells or those kept stripped without co-culture. The grouped oocytes had a better development ratio than those cultured individually, and it was statistically significant. In the experiment N° 2, two different groups were established; one with a complete cumulus complex and other with a partially removed complex. From 326 matured oocytes, 235 (72.1%) cleaved, 160 (49.1%) reached morula stage and 79 (24.2%) developed to blastocyst. Whereas, from 411 demi-naked oocytes, 354 (86%), 72 (17.5%) and 16 (3.8%) developed respectively. Again, the best development percentage was the group with complete cumulus complex, which was statistically significant (p<0.05). It can be concluded that cumulus cells have a positive effect on in vitro maturation and/or fertilization, it must surround the oocyte more than 50% of its surface and the use of co-culture does not substitute the cumulus effect on oocyte development. Besides, there are higher rates when oocytes are cultured in groups than individually.
Palabras Clave:
bovino; co-cultivo; Cumulus ooforus; fecundación in vitro; maduración in vitro
Palabras Clave:
bovine; co-culture; Cumulus oophorus; in vitro fertilization; in vitro maturation
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
Lorenzini Gajardo, Emilio José
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/1997/fvl869d/doc/fvl869d.pdf