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Título:
Evaluación de nuevos anticuerpos monoclonales contra diferentesantigenos de Renibacterium salmoninamm para el diagnostico inmunoenzimatico (ELISA) de la enfermedad bacteriana del riñón (BKD) en peces almonideos
Autor:
López Clasing, Juan Pablo
Profesor Patrocinante:
Farías Rojas, Carlos
Grado a Optar:
Médico Veterinario - Licenciado en Medicina Veterinaria
Materia:
Renibacterium Salmoninamm; enfermedades de peces
Universidad:
Universidad Austral de Chile
Facultad:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Escuela:
Escuela de Medicina Veterinaria
Año de Aceptación:
1997
Resumen:
En los últimos años Renibacterium salmoninarum el agente de la Enfermedad Bacteriana del Riñón (BKD), ha sido objeto de intensa investigación tendiente a su prevención y control. Sin embargo esta enfermedad continúa siendo una de las principales causas de mortalidad en la salmonicultura mundial. Sin duda el éxito en el control de BKD se basa en la eficiente y oportuna detección del patógeno en los peces infectados, particularmente en los reproductores que son portadores asintomáticos del patógeno. El ensayo inmuno-enzimático (ELISA) es la técnica diagnóstica más utilizada y confiable, sin embargo, los actuales kits comerciales de ELISA para BKD poseen problemas de reacción cruzada con otras bacterias y/o detectan un sólo antígeno denominado proteína p57, la cual se encuentra en muy baja concentración en peces tratados con antibióticos o que son portadores asintomáticos. En el presente estudio, se estandarizó un test ELISA basado en nuevos anticuerpos monoclonales específicos contra R. salmoninarum. El aislado ATCC 33209, cultivado en agar KDM-2, se utilizó como control positivo. Se realizó el análisis de 7 diferentes líneas celulares de hibridomas. Todos ellos se cultivaron en medios RPMI y DMEM y lograron una adecuada densidad celular, sin embargo, sólo el 11D11 logró producir anticuerpos monoclonales. Se diseñó y evaluó un test de ELISA mixto, en el cual participaron anticuerpos policlonales y el monoclonal 11D11. Además, el nuevo ELISA fue comparado con un kit comercial de características similares. Para ello, se analizaron 50 muestras de tejido renal de peces salmónidos sospechosos de BKD con ambos test ELISAs, no encontrándose diferencia estadística significativa entre ellos. Se realizó además la comparación entre los anticuerpos monoclonales 11D11 y otro de origen comercial. Se analizaron 50 muestras de tejido renal sospechosos de BKD. Tampoco existió diferencia estadística significativa. El nuevo ELISA fue además, analizado utilizando antígenos purificados (proteína p57 y productos extracelulares) de R. salmoninarum frente a los cuales obtuvo adecuados niveles de detección. En el estudio de reacción cruzada, no se observó reactividad con ninguna de las bacterias patógenas utilizadas.
Abstract:
In the last five years, Renibacterium salmoninarum the etiological agent of Bacterial Kidney Disease (BKD), have been under intensive research intented to prevent and to control the disease. In spite of this, BKD still is one of the main sources of mortality among the fish. There is no doubts that the control of BKD is based on the efficient and promt detection of the pathogen in infected animáis, particularly the broodstock which are asymptomatic carriers of the disease. The enzyme-linked immunoabsorvent assay (ELISA) is the most used and reliable the diagnostic techniques available for BKD. However, the commercial ELISA kits available for this pathogen have been shown some technical problems due to cross reaction with other bacterial species and/or for the detection of only one antigen of the pathogen, the p57 protein, which have been found at very low concentrations in antibiotic treated fish and also in the carriers . In the present study, an ELISA test was standardised. It was based on a library of novel and specific monoclonal antibodies against R. salmoninarum. The type isolated ATCC 33209, grown in KDM-2, was used like positive control. Seven hybridoma cell lines cultured in RPMI and DMEM media. All of them obtained a good cellular densities, but only the 11D11 was shown to produce monoclonal antibodies. The ELISA test was used designed using both polyclonal and monoclonal antibodies 11D11. Later it was compared with a commercially available ELISA kit. To do this , 50 kidney tissue samples suspected to be infected with the pathogen were submitted to both ELISA test. No statistic difference between them were found. The monoclonal antibody 11D11 was also compared with a similar commercially available antibody using 50 kidney tissue samples suspected of BKD. Once again, no statistic difference between them were found. The new ELISA was also tested using purified antigens (p57 protein and extracellular products) of R. salmoninarum which showed good detection levels. In the cross reaction study, none of the bacterial species included in the analysis showed reaction with monoclonal antibody 11D11.
Palabras Clave:
BKD; ELISA; anticuerpo monoclonal; Renibacterium salmoninarum
Palabras Clave:
BKD; ELISA; monoclonal antibody; Renibacterium salmoninarum
Editor:
Universidad Austral de Chile - Sistema de Bibliotecas - Programa Cybertesis
Formato:
text/pdf
Idioma:
es
Copyright:
López Clasing, Juan Pablo
Dirección Electrónica:
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/1997/fvl8641e/doc/fvl8641e.pdf